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タンパク質障害物を利用したCRISPR-Cas3による遺伝子欠損領域の制御

利用蛋白质障碍通过 CRISPR-Cas3 控制基因缺陷区域

基本信息

批准号：
21K15361
负责人：
小島佑介
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

E. coli CRISPR-Cas3システムは任意の配列から一方向に長鎖欠損変異を誘導する事ができる新規国産ゲノム編集ツールである。Cas3はDNAヘリカーゼ活性によりDNAを巻き取りながら移動し、DNAニッカーゼ活性によってDNAを次々と切断していくことで長い欠損変異を誘導すると考えられているが、その欠損変異の長さについては様々である。このCas3システムを精密なゲノム編集ツールとして確立させるには、欠損変異の長さを制御する方法の開発が不可欠であるが、現状ではこれを制御する方法は無い。そこで本研究はCRISPR-Cas3による遺伝子欠損領域を制御する技術開発を目標としており、２年度目はCas3がゲノム上を移動する際に遭遇するタンパク質を解析する方法の開発を行なった。結果として、上記Cas3がどのようなタンパク質とゲノム上で遭遇しているか解析する技術の開発に成功した。この方法は申請時提案したものとは違った方法だが、特定の因子だけでなく、より包括的に解析できる点において、優れた方法であると考えている。この解析の結果、潜在的にCas3の欠損変異のパターンを変化させ得るいくつかの因子について検出を行うことができ、今後の技術開発に重要となると思われる。最終年度は、初年度、２年度目に得られた知見や技術をもとに、効率よくCas3欠損変異のパターンを制御する方法について具体的に検討し、その有用性を示していく予定である。

E. coli CRISPR-Cas3 is a new type of system that can be used for any configuration, long-term locking, and short-term variation. Cas3 DNA is not active, DNA is not active. The Cas3 system has been established in a precise way, and the development of a method for controlling variation is not possible. This study aims at the technical development of CRISPR-Cas3 in order to control the loss field of the transmission, and the technical development of CRISPR-Cas 3 in order to move the transmission field of CRISPR-Cas 3 in 2002. As a result, the development of CAS3 technology was successful. This method is based on the analysis of the proposed method, the specific factor, and the optimal method. The results of this analysis, the potential of Cas3 's loss variation, the change of factors, and the importance of future technical development The final year, the first year, and the second year are expected to have specific discussions and usefulness.