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皮膚糸状菌の病原性発現機構に関わる細胞内シグナル伝達系の解析

皮肤癣菌致病性表达机制涉及的细胞内信号转导系统分析

基本信息

批准号：
21K15438
负责人：
石井雅樹
金额：
$ 3万
依托单位：
Musashino University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

白癬（水虫）は皮膚糸状菌によって引き起こされる浅在性真菌感染症であり、１０人に１人以上が感染していると言われるほど一般的な疾患である。皮膚糸状菌の細胞内シグナル伝達系は病原性と深い関係にあるが、その分子機構については未だ不明な点が多い。本研究では、皮膚糸状菌の病原性発現制御に関わる細胞内シグナル伝達系に着目し、皮膚糸状菌の菌糸成長における役割を明らかにすることを目的とする。本課題は皮膚糸状菌の菌糸成長に必要なRac及びCDC42経路に着目し、その下流で働くプロテインキナーゼp21-activated kinase（PAK）の機能解析を行なっており、本年度はPAKの機能を欠損株及び条件発現株を用いて解析、検証した。皮膚糸状菌PAKの一つであるCla4欠損株は菌糸成長が著しく制限されることを昨年度までの検討で見出していた。そこで、抗真菌薬を用いた際に更なる菌糸成長の遅延が見られるか検討したところ、イトラコナゾールやテルビナフィンといった抗真菌薬で処理することで親株に比べ、より菌糸成長が抑制されていた。細胞内局在やタンパク質の相互作用、キナーゼ活性などを検出するため、HAタグを融合したCla4タンパク質を皮膚糸状菌に過剰発現させた。その結果、得られた菌の細胞破砕液を抗HAタグ抗体により免疫沈降した画分に目的のタンパク質と分子量の一致するバンドを確認した。得られた菌は顕微鏡観察した際、菌糸形態が異常であった。本研究は皮膚糸状菌の細胞内シグナル伝達系の生理機能の理解を深めることに繋がり、創薬における新規分子標的の発見につながると期待される。

White fungus (water worm) skin fungus infection caused by light fungal infection, more than 1 person in 10 people infected, general disease The intracellular structure of dermatophyte is related to pathogenicity and molecular mechanism. This study aimed to investigate the effects of intracellular infection on pathogenic development of dermatophytes. This project aims to analyze the function of Rac and CDC42 essential for the growth of dermatophyte bacteria, and to identify the use of PAK in the analysis and identification of functional deficit strains and conditional development strains. A review last year revealed that the growth of the Cla4 deficient strain of dermatophyte PAK is limited. In addition, antifungal agents are used to inhibit the growth of bacteria and inhibit the growth of parent plants. The interaction between the two substances in the cell, the activity of the enzyme, the detection of the enzyme, the fusion of the enzyme and the development of the enzyme in the skin The results showed that the anti-HA antibody in the cell-breaking solution obtained from the bacteria was consistent with the molecular weight of the target protein. Microscopic examination of the bacteria was performed, and the morphology of the bacteria was abnormal. This study is aimed at deepening the understanding of the physiological functions of the intracellular system of dermatophytes and to explore new molecular targets for their development.