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肺ウイルス感染による宿主免疫応答に対するPI3キナーゼδ阻害剤の効果の解明

阐明PI3激酶δ抑制剂对肺部病毒感染诱导的宿主免疫反应的影响

基本信息

批准号：
21K15471
负责人：
神尾敬子
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

患者より採取した気道上皮細胞を用いて、PI3Kδ阻害剤がヒトメタニューモウイルス感染時に共抑制分子PD-L1の発現増強を抑制し、一方で自然免疫である抗ウイルスインターフェロンの産生を増強を介して、PD-L2の発現をさらに増強することを示した。ウイルス特異的細胞障害性T細胞の活性化を抑制することで感染の遷延化に関わるPD-L1とは異なり、PD-L2はCD4陽性T細胞を活性化させ、PD-L1/PD-1結合を抑制することで病原体の排除を促進するとの報告がある。すなわち気道ウイルス感染時に、PI3Kδを介した自然免疫と獲得免疫のクロストークがあり、PI3Kδ阻害剤は自然免疫・獲得免疫両面からウイルスの排除に対し促進的に作用する可能性があることを報告した（Ogawa T et al. Front Immunol. 2021 Nov 25;12:767666.)。本年度はex vitroで示したPI3Kδ阻害剤の抗ウイルス効果・抗炎症効果を、マウス感染モデルで解明する目的に、PCLS (precision-cut lung slices)という技術を用いてマウス肺 ex vivo培養系のmethodを確立した。具体的には、振動刃ミクロトームを用いてマウス肺を損傷することなく200-500ミクロンの切片に切り出し、気道上皮細胞、平滑筋細胞、免疫担当細胞や神経細胞などの多種多様な細胞と、細胞外基質からなる3次元肺微小環境を実験的に再現し、長期培養する技術を確立した。また長期培養後のPCLSからのRNA抽出による遺伝子発現評価が可能であり、PCLSヘヒトメタニューモウイルスを感染後の経時的なウイルス増殖能と、抗ウイルスインターフェロンや炎症性サイトカイン・ケモカインなどの免疫応答誘導を確認した。

The increase in the production of PD-L1 and PD-L2 in patients infected with PI3K delta inhibitors was mediated by the increase in the production of PD-L1 and PD-L2 in natural immunity. The inhibition of activation of CD4-positive T cells by PD-L1 and PD-L2, the inhibition of PD-L1/PD-1 binding, and the promotion of pathogen elimination are reported. PI 3Kδ may be involved in natural immunity, acquired immunity, and the role of PI 3 K δ inhibitors in promoting natural immunity, acquired immunity, and the elimination of PI3Kδ is reported (Ogawa T et al. Front Immunol. 2021 Nov 25;12:767666.). This year, we have established a method for ex vivo culture system using PCLS (precision-cut lung slices) technology to demonstrate the anti-inflammatory effect and anti-inflammatory effect of PI3K delta inhibitors. The specific techniques for the reconstruction and long-term culture of lung micro-environment in three dimensions were established, including the isolation of lung micro-environment from 200-500 micro-sections, epithelial cells, smooth muscle cells, immune-responsible cells and neurons. The expression of PCLS mRNA was evaluated after long-term culture, and the expression of PCLS mRNA was evaluated. The expression of PCLS mRNA was evaluated after long-term culture. The expression of PCLS mRNA was evaluated. The expression of PCLS mRNA was evaluated after infection. The expression of PCLS mRNA was evaluated after infection. The expression of PCLS mRNA was evaluated. The expression of PCLS mRNA was evaluated after infection. The expression of PCLS mRNA was evaluated. The expression of PCLS mRNA was evaluated after infection. The expression of PCLS mRNA was evaluated. The expression of PCLS mRNA was evaluated after infection.