NSAIDsによるABCC3とROSを介した家族性大腸腺腫症の発癌抑制機構の解明

既存の論文より活性酸素種(ROS)がABCC3の基質である可能性が高いと考え、実験を施行していたが、我々の実験結果にてABCC3はROSを排出するのではなく、ROSを検出するために用いていた試薬であるdichlorodihydrofluorescin diacetateを排出しているということが判明した。これによって実験結果を大きく変更する必要性が生じた。そのため令和４年度は当初の計画を変更し以下の研究を行った。以前、大腸癌においてABCC3の発現がWntシグナルによって抑制されていることを示したが、令和４年度は、まずこの事象が家族性大腸腺腫症(FAP)における腺腫の段階でも生じていることを確かめるための実験を行った。これまで１例の患者由来の腺腫において結果を示していたが、新たに４例の患者の腺腫においてもABCC3の発現低下を確認した。さらに公開されているデータベースの解析においてもFAPモデルマウスの腺腫由来のオルガノイドでABCC3の発現低下が確認された。次にROSに代わるABCC3の基質候補として、我々が過去に使用してきたデオキシコール酸(DCA)に着目し、DCAが大腸癌発癌に関わるMAPKシグナルに与える影響を解明する実験を行った。ABCC3を過剰発現させた大腸癌細胞株（SW620, HT-29）にDCAを加えた結果、Controlに比べてMAPKシグナルの活性化を示すERKのリン酸化がタンパクレベルで抑制されていることが明らかとなった。その結果からABCC3の発現上昇によってDCAによるMAPKシグナルの活性化が抑制されることが示唆された。過去の研究でSW620においてABCC3の発現により細胞内DCA濃度が変化することが示唆されているため、ABCC3が細胞内のDCA濃度変化に影響を与え、その結果MAPKシグナルの活性化にも影響を与えていると考えられた。

既存の論文より活性酸素種(ROS)がABCC3の基質である可能性が高いと考え、実験を施行していたが、我々の実験結果にてABCC3はROSを排出するのではなく、ROSを検出するために用いていた試薬であるdichlorodihydrofluorescin diacetateを排出しているということが判明した。これによって実験結果を大きく変更する必要性が生じた。そのため令和４年度は当初の計画を変更し以下の研究を行った。以前、大腸癌においてABCC3の発現がWntシグナルによって抑制されていることを示したが、令和４年度は、まずこの事象が家族性大腸腺腫症(FAP)における腺腫の段階でも生じていることを確かめるための実験を行った。これまで１例の患者由来の腺腫において結果を示していたが、新たに４例の患者の腺腫においてもABCC3の発現低下を確認した。さらに公開されているデータベースの解析においてもFAPモデルマウスの腺腫由来のオルガノイドでABCC3の発現低下が確認された。次にROSに代わるABCC3の基質候補として、我々が過去に使用してきたデオキシコール酸(DCA)に着目し、DCAが大腸癌発癌に関わるMAPKシグナルに与える影響を解明する実験を行った。ABCC3を過剰発現させた大腸癌細胞株（SW620, HT-29）にDCAを加えた結果、Controlに比べてMAPKシグナルの活性化を示すERKのリン酸化がタンパクレベルで抑制されていることが明らかとなった。その結果からABCC3の発現上昇によってDCAによるMAPKシグナルの活性化が抑制されることが示唆された。過去の研究でSW620においてABCC3の発現により細胞内DCA濃度が変化することが示唆されているため、ABCC3が細胞内のDCA濃度変化に影響を与え、その結果MAPKシグナルの活性化にも影響を与えていると考えられた。