アルツハイマー病のタウ病理形成におけるオートファジー関連蛋白ATG9Aの役割

アルツハイマー病（AD）のタウ病理形成におけるATG9Aの関与について解明することを目的として研究を行った。令和3年度には神経変性疾患の各種病理マーカーにおけるATG9Aの局在を免疫組織学的に検討し、神経変性疾患で生じる各種病理マーカーのうち、ADの変性神経突起にのみATG9Aが局在することを確認した。さらに、タウ遺伝子を導入した培養細胞モデルを用いて、siRNAによってATG9Aの発現を抑制した状態でのタウ蛋白発現を、ウエスタンブロッティングによって検討したところ、ATG9AのsiRNAを導入した培養細胞のRIPA可溶性画分は、対照のsiRNAを導入した培養細胞に比べてタウ蛋白の発現が低下していることを確認した。以上の結果から、オートファジーの異常でタウ蛋白の発現に変化が生じる可能性があり、タウ病理形成においてATG9Aが関与していることが示唆されると考えられた。令和4年度には、ATG9AのsiRNAを導入した培養細胞のRIPA不溶性画分についてもRIPA可溶性画分と同様の検討を行った。ATG9AのsiRNAを導入した培養細胞のRIPA不溶性画分は、対照のsiRNAを導入した培養細胞に比べてタウ蛋白の発現が低下している傾向を認めたが、複数回の検討を行ったところ、統計学的に有意な結果は得られなかった。RIPA不溶分画の可溶化のために種々のバッファーを用いた検討を行っているが、今後はsiRNAのノックダウン効率を上げる方法の検討や、蛋白抽出の最適条件についても検討を行っていく予定である。

アルツハイマー病（AD）のタウ病理形成におけるATG9Aの関与について解明することを目的として研究を行った。令和3年度には神経変性疾患の各種病理マーカーにおけるATG9Aの局在を免疫組織学的に検討し、神経変性疾患で生じる各種病理マーカーのうち、ADの変性神経突起にのみATG9Aが局在することを確認した。さらに、タウ遺伝子を導入した培養細胞モデルを用いて、siRNAによってATG9Aの発現を抑制した状態でのタウ蛋白発現を、ウエスタンブロッティングによって検討したところ、ATG9AのsiRNAを導入した培養細胞のRIPA可溶性画分は、対照のsiRNAを導入した培養細胞に比べてタウ蛋白の発現が低下していることを確認した。以上の結果から、オートファジーの異常でタウ蛋白の発現に変化が生じる可能性があり、タウ病理形成においてATG9Aが関与していることが示唆されると考えられた。令和4年度には、ATG9AのsiRNAを導入した培養細胞のRIPA不溶性画分についてもRIPA可溶性画分と同様の検討を行った。ATG9AのsiRNAを導入した培養細胞のRIPA不溶性画分は、対照のsiRNAを導入した培養細胞に比べてタウ蛋白の発現が低下している傾向を認めたが、複数回の検討を行ったところ、統計学的に有意な結果は得られなかった。RIPA不溶分画の可溶化のために種々のバッファーを用いた検討を行っているが、今後はsiRNAのノックダウン効率を上げる方法の検討や、蛋白抽出の最適条件についても検討を行っていく予定である。