权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

CARD9遺伝子変異の機能解析法の確立

CARD9基因突变功能分析方法的建立

基本信息

批准号：
21K15904
负责人：
香川礼子
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15904/
关键词：
CARD9 NF-kB IL1B IL6 IL8 CXCL1 CARD7 機能解析 TNF-α IL-6 IL-8 CARD7欠損症原発性免疫不全症真菌感染症

项目摘要

CARD9欠損症は、CARD9遺伝子の機能喪失型変異により発症する原発性免疫不全症である。本症は早期診断、治療がのぞまれるが、特徴的な生化学所見がないため、臨床所見と遺伝子検査が現在の診断手段である。診断には現在次世代シークエンスなどが使用されているが、遺伝子解析で検出される変化の病的意義の評価が必要となる。本研究では、CARD9変異の病的意義を正確に判断するためのin vitro評価系を開発している。本研究では、本邦初のCARD9新規変異患者を遺伝子解析において同定した。患者細胞においてCARD9のmRNA、タンパク発現は正常に認めた。患者細胞のCD14+単球を用いて、カンジダまたは黒色真菌で刺激したところ、TNF-α, IL-6, IL-8の産生が低下していた。追加実験として、無症状で同胞のCD14+細胞をおこなったところ同様にTNF-α, IL-6, IL-8の低下が示された。一方で、LPSの刺激ではTNF-α, IL-6, IL-8は正常反応を示した。つぎに、HEK293T細胞に変異型CARD9を強制発現させCARD9変異タンパクの検討、NF-kB転写活性を評価したが、野生型との有意差を認めなかった。HEK293T細胞に変異型CARD9を発現させることで誘導される下流の分子群（IL1B, IL6, IL8, CXCL1など）の評価を行なった。野生型または変異型CARD9導入することで誘導されるIL1B, IL6, IL8, CXCL1のmRNAを定量PCRで測定したところ、IL8の低下が認められた。次に、CRISPR/Cas9を用いたCARD9-null THP-1細胞の作製を行なった。この細胞に野生型または変異型CARD9を強制発現させ、真菌刺激によるするIL1B, IL6, IL8, CXCL1のmRNAを定量PCRで測定している。

CARD9 deficiency, CARD9 gene dysfunction, and genetic immunodeficiency This disease includes early diagnosis, treatment, biochemical findings, clinical findings, genetic investigation and current diagnostic methods. Diagnosis is necessary for the evaluation of the significance of detecting and transforming diseases in the next generation. This study is aimed at correctly judging the significance of CARD9 and developing the evaluation system in vitro. This study is based on the analysis of genetic variation in CARD9 patients. CARD9 mRNA, mRNA and protein expression in patient cells are normal. The production of CD14 + in the patient's cells was reduced due to the stimulation of black fungi, TNF-α, IL-6 and IL-8. CD14 + cells in asymptomatic and asymptomatic siblings were also found to be low in TNF-α, IL-6, IL-8. TNF-α, IL-6 and IL-8 were stimulated by LPS, but normal responses were observed. HEK293T cells were evaluated for CARD9 variant, NF-kB variant activity, wild-type variant and intentional variant. HEK293T cells contain variant CARD9, which is induced by IL-1B, IL-6, IL-8 and CXCL-1. The expression of IL-1B, IL-6, IL-8, CXCL-1 mRNA was detected by quantitative PCR after induction of wild-type CARD-9 variant. CRISPR/Cas9 was used to control CARD9-null THP-1 cells. The mRNA levels of IL1B, IL6, IL8, and CXCL1 in these cells were determined by quantitative PCR in response to wild type or mutant CARD9 stress and fungal stimulation.