全身性エリテマトーデスの抗DNA抗体とHLAクラスIIの関連性についての研究

系统性红斑狼疮抗DNA抗体与HLA II类关系的研究

• 批准号: 21K16285
• 负责人: 辻 英輝
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16285/
• 关键词: 全身性エリテマトーデス; 抗DNA抗体; 自己抗体; B細胞; HLA; DNA; 自己免疫疾患; 主要組織適合遺伝子複合体

本研究は全身性エリテマトーデス（SLE）に関わるHLAクラスII分子の機能を解析し、抗DNA抗体の産生機序を解明することを目的とする。そのため、①HLAクラスII分子によるDNAの提示能の解析、②HLAクラスII分子によって提示されるDNAによるDNA応答性B細胞受容体（BCR）刺激実験、③マウスを用いたDNA/HLAクラスII分子複合体による抗DNA抗体産生実験を計画した。HLAクラスII分子（HLA-DR15）発現細胞とゲノムDNAと共培養したところ、細胞表面のHLA-DR15とDNAの結合が確認された。B16F10細胞でのIFN-刺激下で細胞表面に発現させた内在性のMHCクラスII（H-2b）分子とDNAの結合も確認された。Biotin化DNAをHLAクラスII発現細胞と共培養したlysateをstreptavidinで沈降しWestern-blotしたところ、DNAとHLA-DR15の結合が確認された。さらに、HLA-DR15のペプチド結合溝に特異的に結合するSP3ペプチドを用いたところ、DNAのHLAクラスII分子への結合が競合阻害され、HLAクラスII分子へのDNAの特異性が検証された。HLAクラスII分子各アリルとDNAの結合能がSLEの疾患感受性と関連するかを検討したところ、有意な相関がみとめられた(r=0.64,p=0.017)。DNA応答性BCR発現レポーター細胞を作成した。その細胞を用いて実験②のHLAクラスII分子によって提示されるDNAによるDNA応答性BCR刺激実験を行い、B細胞の活性化が確認された。また、Covid19流行のため実験の中断や学会に参加できなかった期間があった。現在、③マウスを用いたDNA/HLAクラスII分子複合体による抗DNA抗体産生実験を進行中である。

The purpose of this study is to elucidate the function of HLA II molecules and the mechanism of anti-DNA antibody production in systemic lupus erythematosus (SLE). (1) Analysis of HLA II molecular DNA cues;(2) Stimulation of HLA II molecular DNA cues;(3) Development of anti-DNA antibody using DNA/HLA II molecular complexes; HLA-DR15-expressing cells must be co-cultured with HLA-DR15-expressing DNA, and binding of HLA-DR15-expressing DNA to the cell surface must be confirmed. B16F10 cells were stimulated by IFN-and the binding of MHC II (H-2b) molecules to DNA was confirmed. Biotin DNA binding to HLA DR15 was confirmed by Western-blot in co-culture of HLA DR15 cells with lysate streptavidin In addition, HLA-DR15 protein binding groove specific binding, SP3 protein binding, DNA binding to HLA class II molecules, competitive inhibition, HLA class II molecular DNA specificity evidence. DNA binding of HLA II molecules was associated with SLE susceptibility (r= 0.64, p =0.017). DNA response BCR gene expression The activation of B cells was confirmed by DNA responsive BCR stimulation. Covid-19 is popular, but it's not. Now, the DNA/HLA complex is in progress.

项目成果

基礎研究のすすめ

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• 发表时间: 2022
• 作者: Tsuji Hideaki;Ohmura Koichiro;Jin Hui;Naito Ryota;Arase Noriko;Kohyama Masako;Suenaga Tadahiro;Sakakibara Shuhei;Kochi Yuta;Okada Yukinori;Yamamoto Kazuhiko;Kikutani Hitoshi;Morinobu Akio;Mimori Tsuneyo;Arase Hisashi;辻 英輝
• 通讯作者: 辻 英輝