抗DNA抗体を用いたCD34陽性細胞への遺伝子導入

使用抗 DNA 抗体将基因转移至 CD34 阳性细胞

• 批准号: 14657238
• 负责人: 佐々木 毅
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657238/
• 关键词: 遺伝子導入; CD34細胞; 抗DNA抗体; ScFv抗体; 造血幹細胞

1.ヒトモノクロナル抗DNA抗体産生B細胞クロン0-81より得たV_H遺伝子を鋳型としたプラスミドを作成し、これを大腸菌による発現系に組み込み、これよりにより抗DNA抗体ScFv抗体(抗DNA-ScFv抗体)を得た。2.ELISA法により抗DNA-ScFv抗体はDNAと特異的に反応することを認めた。すなわち検索した範囲内では抗DNA-FcFv抗体はDNA以外の他の抗原とは有意の結合を示していない。3.全身性エリテマトーデス血清IgGよりDNAカラムを用いて抗DNA抗体(SLE-抗DNA抗体)を精製した。SLE-抗DNA抗体は、T細胞他の細胞に直接的に侵入しうる能力があることを見出した。これは抗原抗体反応によるものではなく、陽性荷電である抗DNA抗体の特異によるものと推定された。この現象はSLE抗DNA抗体にのみ認められ、正常人由来のIgGでは認められなかった。この事は、抗DNA抗体を介して遺伝子(DNA)を細胞内に導入しうる可能性を示唆する。これを確認するために抗DNA ScFv抗体をビオチン化した後にDNAと反応し、結合物を得た。これをT細胞株Jarkatと共存させたところ、DNAに結合した抗DNA-ScFv抗体が細胞内に侵入することをconfocal microscopy studyにより確認した(遺伝子の細胞導入が可能とされる)。4.モノクロナル抗CD34抗体と抗DNA-ScFv抗体をカルボジイシド結合した後に骨髄細胞と反応したところ、結合物は骨髄サンプル中のCD34細胞に選択的に結合することをフローサイトメトリー解析により認めた。5.モノクロナル抗CD34抗体V遺伝子にタグの遺伝子をつけCD34-ScFv-Tagを発現する試みを行った。しかし、充分に活性のあるScFv抗体を採取できず、当初の最終目標であるCD34-ScFv-Tg-抗DNA-ScFv抗体結合DNAによるCD34陽性細胞への遺伝子は達成できなかった。しかし、方法論的には可能であると推測された。

1. The production of anti-DNA antibody was confirmed by the production of anti-DNA antibody and the production of anti-DNA-ScFv antibody (anti-DNA-ScFv antibody). The anti-DNA-ScFv antibody was detected by 2.ELISA method, and the anti-DNA-ScFv antibody was detected by Elisa. The combination of anti-DNA-FcFv antigens other than anti-DNA antigens in the range of anti-DNA antigens shows that the antigens are not sensitive. 3. Systemic anti-DNA antibody (SLE- anti-DNA antibody) was used to detect serum IgG antibody (SLE--DNA antibody). The direct invasion of SLE- anti-DNA antibody and T-cell allogeneic cell is related to the ability of cell invasion. The antigens and antibodies of antigens and antibodies were not specific to the DNA antibodies. It's like the SLE anti-DNA antibody, the normal person, the normal person, the IgG antibody, the normal person. The possibility of the introduction of anti-DNA antibody into the cell (DNA) indicates the possibility of instigation. After confirming that the anti-DNA ScFv antibody was immunized, the DNA antibody was detected and the conjugate was obtained. The co-existence of the cell line Jarkat and the combination of DNA and anti-DNA-ScFv antibodies invaded the cells. The confocal microscopy study cells were confirmed to be positive. 4. The anti-CD34 antibody, the anti-DNA-ScFv antibody, the anti-DNA-ScFv antibody, the anti-DNA antibody, the anti-DNA-ScFv antibody, the anti-CD34 antibody, the anti-DNA antibody, the bone cell, the bone cell, 5. The anti-CD34 antibody V

项目成果

Hirabayashi, Y., Saito, S., Takeshita, M., Kodera, T., Munakata, Y., Ishii, T., Fujii, H., Shimura, M., Sasaki, T.: "Mononeuritis multiplex, protein-losing gastroenteropathy and chroidopathy seen together in a case systemic lupus erythematosus."Modern.Tre

Hirabayashi，Y.，Saito，S.，Takeshita，M.，Kodera，T.，Munakata，Y.，Ishii，T.，Fujii，H.，Shimura，M.，Sasaki，T.：“多发性单神经炎，蛋白质

Minami, T.sasaki, S.Hisamichi et al.: "Dietary factors in relation to clinical manifestations of systemic lupus erythematosus"Journal of Rheumatology. (in press). (2003)

Minami，T.sasaki，S.Hisamichi 等：“与系统性红斑狼疮临床表现相关的饮食因素”风湿病杂志。

Saito, T., Munakata, Y., Fu, Y., Fujii, H., Kodera, T., Miyagawa, E., Ishii, K., Sasaki, T.: "Evaluation of anti-parvovirus B19 activity in sera by assay using quantitative polymerase chain reaction."J.Virol.Methods.. 107. 81-87 (2003)

Saito, T.、Munakata, Y.、Fu, Y.、Fujii, H.、Kodera, T.、Miyakawa, E.、Ishii, K.、Sasaki, T.：“血清中抗细小病毒 B19 活性的评估

Miura, T., Yokoyama, H., Minegishi, N., Sasaki, T., Kaku, M., Harigae, H.: "Flow cytometry of GATA transcription factors."Cytometry.. 56. 1-7 (2003)

Miura, T.、Yokoyama, H.、Minegishi, N.、Sasaki, T.、Kaku, M.、Harigae, H.：“GATA 转录因子的流式细胞术”。 Cytometry.. 56. 1-7 (2003)

Y.Minami, T.Sasaki, Y.Arai et al.: "Lupus Study Group : Psychological Profiles and Health Status in Japanese Female Patients with Systemic Lupus Erythematosus"Journal of Epidemiology. 12. 55-63 (2002)

Y.Minami、T.Sasaki、Y.Arai 等人：“狼疮研究小组：日本女性系统性红斑狼疮患者的心理特征和健康状况”流行病学杂志。