抗DNA抗体を用いたCD34陽性細胞への遺伝子導入

使用抗 DNA 抗体将基因转移至 CD34 阳性细胞

• 批准号: 14657238
• 负责人: 佐々木 毅
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657238/
• 关键词: 遺伝子導入; CD34細胞; 抗DNA抗体; ScFv抗体; 造血幹細胞

1.ヒトモノクロナル抗DNA抗体産生B細胞クロン0-81より得たV_H遺伝子を鋳型としたプラスミドを作成し、これを大腸菌による発現系に組み込み、これよりにより抗DNA抗体ScFv抗体(抗DNA-ScFv抗体)を得た。2.ELISA法により抗DNA-ScFv抗体はDNAと特異的に反応することを認めた。すなわち検索した範囲内では抗DNA-FcFv抗体はDNA以外の他の抗原とは有意の結合を示していない。3.全身性エリテマトーデス血清IgGよりDNAカラムを用いて抗DNA抗体(SLE-抗DNA抗体)を精製した。SLE-抗DNA抗体は、T細胞他の細胞に直接的に侵入しうる能力があることを見出した。これは抗原抗体反応によるものではなく、陽性荷電である抗DNA抗体の特異によるものと推定された。この現象はSLE抗DNA抗体にのみ認められ、正常人由来のIgGでは認められなかった。この事は、抗DNA抗体を介して遺伝子(DNA)を細胞内に導入しうる可能性を示唆する。これを確認するために抗DNA ScFv抗体をビオチン化した後にDNAと反応し、結合物を得た。これをT細胞株Jarkatと共存させたところ、DNAに結合した抗DNA-ScFv抗体が細胞内に侵入することをconfocal microscopy studyにより確認した(遺伝子の細胞導入が可能とされる)。4.モノクロナル抗CD34抗体と抗DNA-ScFv抗体をカルボジイシド結合した後に骨髄細胞と反応したところ、結合物は骨髄サンプル中のCD34細胞に選択的に結合することをフローサイトメトリー解析により認めた。5.モノクロナル抗CD34抗体V遺伝子にタグの遺伝子をつけCD34-ScFv-Tagを発現する試みを行った。しかし、充分に活性のあるScFv抗体を採取できず、当初の最終目標であるCD34-ScFv-Tg-抗DNA-ScFv抗体結合DNAによるCD34陽性細胞への遺伝子は達成できなかった。しかし、方法論的には可能であると推測された。

1. Production of anti-DNA antibody by B cell culture 0-81. Production of anti-DNA antibody ScFv antibody (anti-DNA ScFv antibody) by E. coli. 2. ELISA method to identify the specific interaction between anti-DNA-ScFv antibodies and DNA. Anti-DNA-FcFv antibodies bind intentionally to antigens other than DNA. 3. Systemic anti-DNA antibodies (SLE-anti-DNA antibodies) are purified from serum IgG. SLE-anti-DNA antibodies can directly invade T cells and other cells. Antigen and antibody specificity are presumed to be the most important factors in the development of anti-DNA antibodies This phenomenon is caused by SLE anti-DNA antibody, IgG from normal people. This indicates the possibility of introducing DNA into cells mediated by anti-DNA antibodies. This is the first time I've seen a DNA antibody. The T cell strain Jarkat was identified by fluorescent microscopy and DNA binding. Anti-DNA-ScFv antibodies were detected by fluorescent microscopy. 4. Anti-CD34 antibodies and anti-DNA ScFv antibodies bind to bone marrow cells and bind to bone marrow cells. 5. Try to detect CD34-ScFv-Tag from anti-CD34 antibody V-Tag. CD34-ScFv-Tg-anti-DNA-ScFv antibody binds to DNA, and CD34-positive cell DNA fragments are detected. Methodological considerations may be made.

项目成果

Hirabayashi, Y., Saito, S., Takeshita, M., Kodera, T., Munakata, Y., Ishii, T., Fujii, H., Shimura, M., Sasaki, T.: "Mononeuritis multiplex, protein-losing gastroenteropathy and chroidopathy seen together in a case systemic lupus erythematosus."Modern.Tre

Hirabayashi，Y.，Saito，S.，Takeshita，M.，Kodera，T.，Munakata，Y.，Ishii，T.，Fujii，H.，Shimura，M.，Sasaki，T.：“多发性单神经炎，蛋白质

Minami, T.sasaki, S.Hisamichi et al.: "Dietary factors in relation to clinical manifestations of systemic lupus erythematosus"Journal of Rheumatology. (in press). (2003)

Minami，T.sasaki，S.Hisamichi 等：“与系统性红斑狼疮临床表现相关的饮食因素”风湿病杂志。

Y.Minami, T.Sasaki, Y.Arai et al.: "Lupus Study Group : Psychological Profiles and Health Status in Japanese Female Patients with Systemic Lupus Erythematosus"Journal of Epidemiology. 12. 55-63 (2002)

Y.Minami、T.Sasaki、Y.Arai 等人：“狼疮研究小组：日本女性系统性红斑狼疮患者的心理特征和健康状况”流行病学杂志。

Saito, T., Munakata, Y., Fu, Y., Fujii, H., Kodera, T., Miyagawa, E., Ishii, K., Sasaki, T.: "Evaluation of anti-parvovirus B19 activity in sera by assay using quantitative polymerase chain reaction."J.Virol.Methods.. 107. 81-87 (2003)

Saito, T.、Munakata, Y.、Fu, Y.、Fujii, H.、Kodera, T.、Miyakawa, E.、Ishii, K.、Sasaki, T.：“血清中抗细小病毒 B19 活性的评估

Miura, T., Yokoyama, H., Minegishi, N., Sasaki, T., Kaku, M., Harigae, H.: "Flow cytometry of GATA transcription factors."Cytometry.. 56. 1-7 (2003)

Miura, T.、Yokoyama, H.、Minegishi, N.、Sasaki, T.、Kaku, M.、Harigae, H.：“GATA 转录因子的流式细胞术”。 Cytometry.. 56. 1-7 (2003)