Development of airway epithelial keratinization and barrier function as a novel therapeutic target for asthma

气道上皮角化和屏障功能的发展作为哮喘的新治疗靶点

• 批准号: 21K16308
• 负责人: 井上 英樹
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16308/
• 关键词: 重症喘息; 気道上皮; 真菌; 喘息; アレルギー性喘息; 喘息モデルマウス; 気道炎症; 気道上皮バリアー; 角層蛋白

真菌の気道上皮への曝露への影響を検討するため、気道上皮細胞の培養を用い、真菌抽出液を培地に加えその影響の検討を行った。in vitroでの検討として気道上皮細胞として16HBE14o-, Calu-3の細胞株を用い、培地に浸した状態(submerged)での刺激実験を行った。アレルゲン曝露としてアルテルナリア抽出液の曝露を行い、気道上皮の状態や各種サイトカインの分泌の検討を行った。高濃度のアルテルナリア抽出液の曝露は細胞へのダメージが大きく、細胞死に至ったが、一定濃度以下のアルテルナリア濃度の曝露によっては細胞死には至らなかった。上皮角層蛋白の遺伝子発現を解析したところ、ある一定濃度のアルテルナリア抽出液の曝露によって上皮角層蛋白の１種であるケラチン6bの遺伝子発現の増加が認められた。アルテルナリア抽出液曝露によるサイトカイン分泌を評価するため細胞上清中のサイトカインの測定を行った。IL-6, IL-8などの炎症性サイトカインの測定を行ったが、今回測定した条件下においては有意な変化は認められなかった。アルテルナリア抽出液の濃度および、ELISAの測定条件、細胞上清中の濃度の調整を行い、引き続き検討を行っている状況である。より生体に近い条件での気道上皮細胞の評価を行うため、気相―液相培養(ALI培養)の検討を行った。気道上皮細胞株である16HBE14o-を用いsubmergedの条件下においては、細胞培養はコンフルエントの状況に至ったが、TranswellインサートによるALI培養では、コンフルエントの状況を維持することが難しく、細胞死に至る状況であった。今後、培養液の変更や培養期間の調整を行うことによって、実験に供しうるALI培養の状態を維持するための条件を引き続き検討を行っている状況である。

To investigate the effects of exposure on fungal epithelial cells in vitro and in vitro. The cell line Calu-3 was cultured in vitro and cultured in submerged state. Exposures, status of epithelial cells, and secretion of various enzymes are discussed. Exposure to high concentrations of extract may result in cell death, cell death, or cell death below certain concentrations. Analysis of Keratin Gene Expression in Epithelial Keratin Extracts and Exposure to Certain Concentrations of Keratin Gene Expression in Epithelial Keratin 6b The cell supernatant was evaluated for the presence and absence of the extract. IL-6, IL-8, IL-8, IL-6, IL-8, IL-6, IL-8, IL-9, IL-9, IL-8, IL-6, IL-8, IL-9, IL-9, IL-8, IL-6, IL-8, IL-8, IL-6, IL-8, IL-6, IL-8, IL-8, IL-6, IL-6, IL-8, IL-8, IL- The concentration of the extract solution, the measurement conditions of ELISA, the adjustment of the concentration in the cell supernatant, and the status of the preparation of the assay were discussed. The evaluation of epithelial cells in vitro and in vitro in ALI culture was performed. Cell culture conditions of HBE14o-16 cells were maintained under submerged conditions. In the future, the culture medium should be changed and the culture period should be adjusted. The condition of ALI culture should be maintained.

项目成果

Comprehensive Gene Expression Signature Using RNA-Seq in Airways of Mouse Model of Severe Asthma with Fungal Sensitization

• DOI: 10.1159/000519172
• 发表时间: 2021-09-29
• 期刊: INTERNATIONAL ARCHIVES OF ALLERGY AND IMMUNOLOGY
• 影响因子: 2.8
• 作者: Inoue, Hideki;Akimoto, Kaho;Sagara, Hironori
• 通讯作者: Sagara, Hironori