ペリサイトに着目した脳梗塞超急性期の炎症惹起機構の解明

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脳梗塞により傷害された神経細胞から放出される損傷関連分子パターン群(DAMPs)によって、炎症惹起を引き金に傷害領域の拡大する可能性が示唆されているものの、如何にして炎症反応が展開されるかに関して不明な点が多く残っている。本研究課題では神経損傷後に、迅速な炎症応答が予想される毛細血管を被覆する血管周皮細胞(ペリサイト)に着目し、脳梗塞後超急性期における脳ペリサイトの炎症応答が齎す損傷領域への影響を明らかにすることを目的とする。今年度は、野生型マウスに塞栓系を挿入により中大脳動脈を閉塞することで、一過的に脳虚血を誘導したMCAOモデルを用いて、脳梗塞後の炎症惹起がどの細胞で感知されるのかを調べるために、MCAO後1時間から24時間までの、継時的なNF-κBの核移行頻度を計測した。脳梗塞直後の梗塞巣において、ほとんどNF-κBが検出されないのに対して、数時間後以降では主に血管内皮細胞とペリサイトといった血管系で、NF-κBが核内で検出された。さらに、脳梗塞6時間以降において、約半数のペリサイトでNF-kBが活性化することから、脳ペリサイトが神経傷害による炎症を感知していることがわかった。しかし、RNAscopeを用いて炎症性サイトカインの発現細胞を調べてみると、脳梗塞6時間後では血管内皮細胞やペリサイト以外の細胞で、TNFαやIL-1βなどの炎症惹起因子が検出された。また、ペリサイト特異的なNF-κB遮断マウスの準備が完了し、ノックダウン効率の測定方法の条件検討を試みた。最後に、ペリサイトで発現する炎症惹起因子を同定するための条件検討として、ヒト初代培養ペリサイトがLPS刺激後に応答して、継時的にNF-κBが核移行することを自身達の手技で確認した。