Development of an early diagnosis method for treatment-resistant sarcoma by applying glucose metabolism imaging.

近年、D-グルコースの鏡像異性体L-グルコースに蛍光基を結合した蛍光L-グルコースが、悪性細胞に特異的に取り込まれる可能性が示され注目されている。我々はヒト骨肉腫U2OS細胞が、正常細胞が取り込まない2-NBDLGを取り込むことを確認した。また2-NBDLG投与後の蛍光強度が個々の細胞によって異なることから、U2OS細胞には糖代謝が異なる細胞、すなわち蛍光L-グルコースを豊富に取り込む細胞とほとんど取り込まない細胞が混在すると考えた。本研究は2-NBDLGの取り込みと腫瘍細胞の抗癌剤耐性の関係を検討する。抗癌剤ドキソルビシン（DOX）添加培地で増殖する抗癌剤耐性U2OS細胞を作成した。作成したDOX耐性U2OS細胞がSP分析可能か検討した。SP分析の結果は通常培養U2OS細胞と比較してSP細胞の割合が有意に増加した。そこでU2OS細胞を通常培地で培養した通常群、培地にDOXを加えて培養したDOX群、DOX群をHoechst33342で染色したのちにFACSを用いてSP細胞を分取したSP群を準備しFACSで蛍光グルコースの取り込みを評価した。DOX群はHoechst33342を排出する細胞群が有意に増加した。その薬剤排出能はverapamil（ABCB1阻害剤）によって阻害され、排出の主体はABCB1によるものであることが明らかとなった。またDOX群は通常群に比較して2-NBDLGが2-NBDGとほぼ同量に取り込まれ、DOX耐性細胞で蛍光グルコースの代謝変化が示唆された。通常群と比較してSP群もDOX群と同様に2-NBDGに対する2-NBDLG取り込みの割合が増加した。この取り込みはPhloretin投与で減少したことから、2-NBDLGは細胞の幅広い輸送機構を利用して選択的に取り込まれている可能性が示された。

近年、D-グルコースの鏡像異性体L-グルコースに蛍光基を結合した蛍光L-グルコースが、悪性細胞に特異的に取り込まれる可能性が示され注目されている。我々はヒト骨肉腫U2OS細胞が、正常細胞が取り込まない2-NBDLGを取り込むことを確認した。また2-NBDLG投与後の蛍光強度が個々の細胞によって異なることから、U2OS細胞には糖代謝が異なる細胞、すなわち蛍光L-グルコースを豊富に取り込む細胞とほとんど取り込まない細胞が混在すると考えた。本研究は2-NBDLGの取り込みと腫瘍細胞の抗癌剤耐性の関係を検討する。抗癌剤ドキソルビシン（DOX）添加培地で増殖する抗癌剤耐性U2OS細胞を作成した。作成したDOX耐性U2OS細胞がSP分析可能か検討した。SP分析の結果は通常培養U2OS細胞と比較してSP細胞の割合が有意に増加した。そこでU2OS細胞を通常培地で培養した通常群、培地にDOXを加えて培養したDOX群、DOX群をHoechst33342で染色したのちにFACSを用いてSP細胞を分取したSP群を準備しFACSで蛍光グルコースの取り込みを評価した。DOX群はHoechst33342を排出する細胞群が有意に増加した。その薬剤排出能はverapamil（ABCB1阻害剤）によって阻害され、排出の主体はABCB1によるものであることが明らかとなった。またDOX群は通常群に比較して2-NBDLGが2-NBDGとほぼ同量に取り込まれ、DOX耐性細胞で蛍光グルコースの代謝変化が示唆された。通常群と比較してSP群もDOX群と同様に2-NBDGに対する2-NBDLG取り込みの割合が増加した。この取り込みはPhloretin投与で減少したことから、2-NBDLGは細胞の幅広い輸送機構を利用して選択的に取り込まれている可能性が示された。