ホモシステインによるアポトーシスに着目した難治性絨毛癌に対する新規治療法の開発

开发针对难治性绒毛膜癌的新治疗方法，重点关注同型半胱氨酸诱导的细胞凋亡

• 批准号: 21K16767
• 负责人: 西野 公博
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16767/
• 关键词: ホモシステイン; 葉酸代謝; アポトーシス; 難治性癌; 絨毛癌

・MTX投与によるホモシステイン濃度の上昇についての検討１．絨毛癌細胞内ホモシステイン濃度の測定MTX投与により絨毛癌細胞内ホモシステイン濃度が上昇するか検討するため、絨毛癌細胞株Jar、BeWo、及び、JEG-3の培地にそれぞれ、PBS（コントロールとして用いる）とMTXを添加し、絨毛癌細胞内ホモシステイン濃度を測定を行った。それぞれの絨毛癌細胞を5000個播種し、24時間培養後、PBS、及び、１μMのMTXを添加し、48時間培養した後、細胞抽出液を回収した。細胞抽出液のホモシステイン濃度定量は、セルバイオラボ社のホモシステインELISAキットを用いた。結果は、いずれの絨毛癌細胞株においても、MTX添加により、絨毛癌細胞内ホモシステイン濃度の低下がみられ、予想に反するものであった。播種する絨毛癌細胞数、添加するMTX濃度、MTX添加時間など、様々な組み合わせで条件検討を試みたが、一定の傾向を示す結果は得られなかった。これらの要因として、MTX添加により死滅した絨毛癌細胞が細胞抽出液を回収する段階で除去されてしまうことが一因と考えられた。そこで、MTX投与後の絨毛癌細胞培養上清中ホモシステイン濃度の変化を検討するプランに変更した。２．絨毛癌細胞培養上清中ホモシステイン濃度の測定予備検討として、絨毛癌細胞培養上清中のホモシステイン濃度が正確に測定できるかまず検討することとした。24wellディッシュにJarを5000個播種し、オーバーナイトで培養した。培養上清を除去し、さらにオーバーナイトで培養した。このとき、培養上清は100μLとし、培養上清を全量回収た。回収した培養上清の原液、5倍希釈、10倍希釈したものを用意し、ホモシステイン濃度を測定したところ、希釈倍率に比例して、ホモステイン濃度の低下が認められ、絨毛癌細胞培養上清中のホモシステイン濃度が測定できることを確認した。

The MTX was used to determine the concentration of MTX in the cells of trichoid carcinoma. The cell lines Jar, BeWo, and JEG-3 were added to the cell lines of trichome carcinoma. The intracellular concentration of hair cancer was measured by the method of measuring the degree of hair cancer. The hair cancer cells were inoculated 5000 times, incubated at 24 hours, PBS, and 1 μ M MTX were added, and then the cells were incubated for 48 hours. The cell extraction fluid was used to determine the quantity of the cell extract, and the cell extract was used to determine the quantity of the cell extract. The concentration of the cell extract was measured, and the concentration of the cell extract was measured. The concentration of the cell extract was determined by the concentration of the cell extract. The concentration of the cell extract was determined by the concentration of the cell extract. The concentration of the cell extract was measured. The concentration of the cell extract was measured. The concentration of the cell extract was measured. The concentration of the cell extract was measured. The concentration of the cell extract was measured. The concentration of the cell extract was measured. The concentration was measured. Results the results showed that the cell lines of human hair cancer were infected, MTX was added, and the intracellular concentration of hair cancer was lower than that of normal cells. Sow the number of hair cancer cells, add MTX levels, MTX add time cycles, test conditions to determine the number of cancer cells, and be sure to show the results of the results. The reason for this is that the cell extract is extracted from the hair cancer cell, the cell extract is returned to the cell, and the fluid is removed from the cell because of the death of the hair cancer cell and MTX. After treatment with MTX, the supernatant of human hair cancer cell culture showed that the cell culture supernatant was highly sensitive. 2. The cell culture supernatant of trichocarcinoma cell culture was determined to determine the accuracy of the cell culture supernatant. 24well will conduct 5000 sowing and training programs in Jar. Peel the supernatant to get rid of it, so that you can get rid of it. The supernatant of peel and peel is 100 μ L, and the supernatant of peel is 100 μ L. The original liquid, 5 times, 10 times, 10 times, 5 times, 5 times, 10 times, 5 times, 10 times, 5 times, 5 times, 10 times