CCN2-oriented anti-cancer drug screening

面向CCN2的抗癌药物筛选

• 批准号: 21K17104
• 负责人: 堀江 尚弘
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K17104/
• 关键词: CCN2; shRNA; 骨芽細胞; ゲノム編集; 口腔扁平上皮癌; iPS細胞; 抗がん剤

本研究は結合組織増殖因子（CTGF/CCN2）に着目して，がん細胞におけるCCN2の発現機構を応用することで「新たな抗がん剤を探索すること」を目的としている．本年度は細胞にCRISPR/Cas9 システムを応用したゲノム編集を施し，CCN2遺伝子発現をGFPの蛍光にて検知可能な，CCN2レポーター細胞を樹立することを計画していたが，まず予備検討としてCCN2遺伝子をノックダウンした際の細胞への影響を，骨芽細胞株であるMC3T3-E1細胞にshRNA技術を応用し解析した．MC3T3-E1細胞にCCN2遺伝子のshRNAを施したことにより，CCN2遺伝子発現が低下した細胞株；sh(+)を樹立できた．sh(+)とshコントロール細胞；sh(-)とを比較したところ，細胞形態に明らかな違いは認めなかったが，細胞増殖能についてはsh(+)の方が低下していた．骨関連遺伝子発現(Runx2，Col1，Bglap)はsh(+)群で高発現しており，CCN2関連タンパク質であるβ-CATENIN，MRTF-Aのタンパク質量もsh(+)群で多い傾向にあった．また，骨分化誘導実験においてsh(+)群でALP陽性細胞は多く認められ，MC3T3-E1細胞におけるCCN2遺伝子のノックダウンが同細胞の骨への分化を促進していたため，CCN2は骨芽細胞の骨分化を抑制することが想定された．加えて，樹立した細胞は先行研究から推定されたCCN2関連タンパク質の発現傾向を示しており，骨分化に関与するシグナル伝達の研究・創薬研究への応用が期待される。本進捗状況を2023年3月23日～25日に国立京都国際会館にて開催された，第22回日本再生医療学会総会にて発表した(発表表題；下顎骨発生におけるCTGFの関与について)．

This study aims to explore the mechanism of CCN2 expression in cells by combining CTGF/CCN2. This year, CRISPR/Cas9 gene expression systems were developed to investigate the effects of CCN2 gene expression systems on GFP, CCN2 gene expression systems, and the effects of CCN2 gene expression systems on cell growth. MC3T3-E1 cells were used for shRNA analysis. CCN2 gene shRNA was used for CCN2 gene expression in MC3T3-E1 cells. CCN2 gene expression was decreased in MC3T3-E1 cells. sh(-) Bone-related gene expression (Runx2, Col1, Bglap) is highly expressed in the sh(+) group, CCN2-related gene expression is highly expressed in the β-CATENIN, MRTF-A-related gene expression is highly expressed in the sh(+) group. In addition, ALP-positive cells in the sh(+) group of MC3T3-E1 cells promoted bone differentiation of the same cells, while CCN2 inhibited bone differentiation of bone bud cells. In addition, the establishment of advanced cell research, putative CCN2-related protein development trends, bone differentiation related to the development of research, innovative research and application expectations. The 22nd Japan Society for Regenerative Medicine Conference was held on March 23 - 25, 2023 at the Kyoto International Hall.

项目成果

下顎骨発生におけるCTGFの関与について

关于CTGF参与下颌骨发育

• 发表时间: 2023
• 作者: Yoshida Hisato;Sakashita Masafumi;Adachi Naoto;Matsuda Shinpei;Fujieda Shigeharu;Yoshimura Hitoshi;堀江 尚弘，北川 孝雄，Ekayani Nasrun Nisrina，永易 裕樹，志茂 剛
• 通讯作者: 堀江 尚弘，北川 孝雄，Ekayani Nasrun Nisrina，永易 裕樹，志茂 剛