植物由来芳香族からの効率的な有価物生産のための細菌トランスポーターデザイン

细菌转运体设计，用于从植物芳香烃中高效生产有价值的物质

• 批准号: 22K14821
• 负责人: 藤田 雅也
• 金额: $ 3万
• 依托单位: High Energy Accelerator Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K14821/
• 关键词: リグニン; 細菌内膜; MFSトランスポーター; トランスポーター; バクテリア; 物質生産

初年度は、2種類のMFS輸送体の精製タンパク質取得方法を確立し、クライオ電顕を用いた単粒子解析、等温滴定型熱量測定(ITC)による基質との結合解析を行った。精製タンパク質の取得にはすでに成功していたが、培養時間やbuffer条件などを最適化することにより、これまでの2倍以上の収量で精製タンパク質を得ることに成功した。また、ナノディスクへの再構成法も確立した。界面活性剤に可溶化した目的タンパク質、およびナノディスクい再構成した同タンパク質を用いて、クライオ電顕を用いた単粒子解析を行なった結果、それぞれ4オングストローム、6オングストロームの構造を得ることに成功した。界面活性剤に可溶化した目的タンパク質のデータセットについては現在解析途中であり、今年度中の構造決定が可能であると考えている。また、ナノディスクに再構成した目的タンパク質と、基質との相互作用をITCにより検出することに成功した。

In the first year, the purification and quality acquisition methods of two kinds of MFS carriers were established, and the single particle analysis, isothermal titration calorimetry (ITC), matrix and binding analysis were carried out. The quality of the product was obtained successfully by optimizing the culture time and buffer conditions. The yield of the product was more than twice that of the product. The method of reconstruction is established. The results of the analysis of single particles in the interface active agent solubilization and re-composition were as follows: 4. The structure of the interface active agent was successfully obtained. The solubility of the interfacial active agent is determined by the structural determination of the present analysis. The object of the reconstruction is to create a matrix for the interaction between the two.