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セラミド非小胞輸送に関与する新規タンパク質の同定と機能解明

参与神经酰胺非囊泡运输的新型蛋白质的鉴定和功能阐明

基本信息

批准号：
22K14863
负责人：
池田敦子
金额：
$ 3万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K14863/
关键词：
酵母 Tricalbin セラミド非小胞輸送脂質ホメオスタシス

项目摘要

細胞内セラミドの量はオルガネラ間輸送によってコントロールされている。小胞体からゴルジ体へのセラミド輸送には、小胞輸送に加えて非小胞輸送が存在する。これまでの解析から私たちは、真核細胞で保存された小胞体膜タンパク質であるTricalbin (Tcb1, 2, 3) が、セラミドの非小胞輸送に必要であることを発見した。しかしながら、Tricalbinの機能がどのように制御されているか、他にはどのようなタンパク質が関与しているのかなど、セラミド非小胞輸送機構の全貌は未だ謎に包まれている。そこで本研究は、セラミド非小胞輸送に関与する候補タンパクのリストアップと機能同定を目指す。この目的を達成するために本年度は、Tcb3タンパク質と相互作用するタンパク質の同定を試みた。研究実績の概要は、以下の3点である。(1)Tcb3ドメインと相互作用する細胞質タンパク質の同定：GFPタグを融合したTcb3の細胞質ドメインを用いて、抗GFP抗体を用いた免疫沈降法によって結合タンパク質を精製し、質量分析によって同定を行った。 (2) Tcb3と相互作用する膜タンパク質の同定：当初は技術的に困難であると予想されたことから、細胞質タンパク質のみを対象として解析する予定であった。しかし、実験手法を洗練したことにより、膜タンパク質の精製および同定に成功した。(3)同定されたタンパク質とTcb3の結合について、免疫沈降法およびウエスタンブロッティングによって検証を行い、候補となるタンパク質をリストアップした。

In the cell, there is an increase in the amount of food in the cell. there is an increase in the amount of food in the cell. The small cell body, the small cell body, the small cell body, The cells of eukaryotic cells, small body membrane, non-small cells, Tricalbin (Tcb1, 2, 3), non-small cells, eukaryotic cells, non-small cells, and non-small cells. The system, the Tricalbin machine, the machine. In this study, the non-small cell delivery system and the waiting list can be used to determine the same target. The purpose of this year is to make sure that this year, Tcb3 will interact with each other and that you will agree with each other. Study the summary and the following three points. (1) the interaction between Tcb3 antigens and cytokines was identical: GFPs were fused, Tcb3 antibodies were fused, anti-GFP antibodies were used by immunoprecipitation method, and quantitative analysis was performed. (2) the interaction between the Tcb3 and the membrane is the same: at the beginning of the technology, you wanted to make a difference, and you wanted to make a difference. The method of washing is the same as that of success. (3) the method of immunoprecipitation combined with Tcb3 and immunoprecipitation method was used to treat the patients and wait for them.