Establishment of reverse genetics system and treatment for Colorado tick fever virus

科罗拉多蜱热病毒反向遗传学体系的建立及治疗

• 批准号: 22K15011
• 负责人: 南 昌平
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15011/
• 关键词: コロラドダニ熱ウイルス; マダニ媒介性感染症; リバースジェネティクス; 人獣共通感染症; リバースジェネティクス法

既存のコロラドダニ熱ウイルス(CTFV) cDNAをクローニングしたプラスミドでは組換えCTFVの回収ができなかったため、再度増殖性の高いウイルスを選定することとした。多様な細胞株へとCTFVを感染させ、その増殖能を評価した。また、CTFV 15株をVero細胞へと感染させ、プラーク形成能を評価し、リバースジェネティクス法の親株を選定した。選定した株をT7プロモーター及びターミネーターを付与したプラスミドへウイルスゲノムcDNAをクローニングし、T7ポリメラーゼ恒常発現細胞であるBHK-T7/9細胞へトランスフェクションした。細胞内でプラスミドDNAから転写されたRNAをゲノムに持つ人工組換えCTFVの作出に成功した。作出された組換えCTFVは野生株と同様の増殖性を示し、12本あるウイルスゲノムも同様の大きさであったが、人工的に加えられたアミノ酸変異のない塩基置換（非同義置換）が確認され、人工的に作製されたウイルスであることが確認された。この人工組換えCTFV作製法は他のレオウイルス科ウイルスの方法と比べまだ効率性が高くない。確立した本システムによって、1分節が組換わったリアソータントの作出には成功したが、人工遺伝子を導入したレポーターウイルスの回収には至っていない。更なる回収効率の改善が必要であると考え、現在はトランスフェクションするDNA量を調整する等の改善を検討している。また、不活化したCTFVをマウスへと免疫し、抗血清を得た。その結果、マウスの血清はVP7に対する抗体を多く含むことがわかり、抗原性の高いウイルスタンパク質を同定した。

In the existing system (CTFV) cDNA system, please select the following information: the CTFV response, the error response, the reproductive error, the higher fertility, the higher the temperature, and the higher the temperature. Multi-cell lines were infected with CTFV, and the colonies were able to induce infection. The cells of 15 strains of CTFV and CTFV were infected, and the formation ability of the cells was determined. Select the T7 and BHK-T7/9 cells to be paid in the same way as the T7 cell, the BHK-T7/9 cell, the cell and the cell. This is a good example of how to make a successful response to the CTFV of the artificial tissue, which is caused by the DNA in the cell. The RNA is in good condition. Make an indication of the same fecundity of the wild plant of CTFV, 12 copies of the same plant, the artificial one, and the artificial one. The method of artificial tissue CTFV is much higher than that of other methods. Make sure that you can make sure that you are successful, and that you can make sure that you are successful, and that you can make sure that you do not know what to do. Make sure that you do not know what to do. It is necessary to improve the recovery rate, and now to improve the amount of DNA and so on. Inactivated, inactivated CTFV, immune, antisera. The results showed that most of the serum VP7 antibodies contained antigenicity and antigenicity.