Establishment of reverse genetics system and treatment for Colorado tick fever virus

点击翻译按钮获取中文摘要

既存のコロラドダニ熱ウイルス(CTFV) cDNAをクローニングしたプラスミドでは組換えCTFVの回収ができなかったため、再度増殖性の高いウイルスを選定することとした。多様な細胞株へとCTFVを感染させ、その増殖能を評価した。また、CTFV 15株をVero細胞へと感染させ、プラーク形成能を評価し、リバースジェネティクス法の親株を選定した。選定した株をT7プロモーター及びターミネーターを付与したプラスミドへウイルスゲノムcDNAをクローニングし、T7ポリメラーゼ恒常発現細胞であるBHK-T7/9細胞へトランスフェクションした。細胞内でプラスミドDNAから転写されたRNAをゲノムに持つ人工組換えCTFVの作出に成功した。作出された組換えCTFVは野生株と同様の増殖性を示し、12本あるウイルスゲノムも同様の大きさであったが、人工的に加えられたアミノ酸変異のない塩基置換（非同義置換）が確認され、人工的に作製されたウイルスであることが確認された。この人工組換えCTFV作製法は他のレオウイルス科ウイルスの方法と比べまだ効率性が高くない。確立した本システムによって、1分節が組換わったリアソータントの作出には成功したが、人工遺伝子を導入したレポーターウイルスの回収には至っていない。更なる回収効率の改善が必要であると考え、現在はトランスフェクションするDNA量を調整する等の改善を検討している。また、不活化したCTFVをマウスへと免疫し、抗血清を得た。その結果、マウスの血清はVP7に対する抗体を多く含むことがわかり、抗原性の高いウイルスタンパク質を同定した。