核移行型ドナーDNAプラスミドによる新規遺伝子ターゲティング技術の開発

使用核转位供体 DNA 质粒开发新的基因靶向技术

基本信息

  • 批准号:
    22K15029
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.91万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
  • 财政年份:
    2022
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2022-04-01 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究の目的は、長鎖ドナーDNAテンプレートの核移行を介した新規CRISPR-Cas遺伝子ターゲッティング技術の開発である。本年度は、以前の研究にて開発したpCriMGET(plasmid of synthetic CRISPR coded RNA target sequence-equipped donor plasmid mediated gene targeting)システムを改良し、CRISPR-Cas12aを用いた遺伝子ターゲッティングにも対応したpCriMGET_9-12aシステムを開発した。マウス受精卵の核にpCriMGET_9-12aドナープラスミド、Cas12aタンパク質、標的ゲノム切断用crRNAおよびpCriMGET_9-12a切断用crRNAをマイクロインジェクション法により導入し、Rosa26遺伝子領域に全長5.5kbの長鎖ドナーDNAテンプレートをCRISPR-Cas12aを用いて挿入したノックインマウスの樹立に成功した。また、Hipp11領域に全長5kbの長鎖ドナーDNAテンプレートをCRISPR-Cas9を用いて挿入したノックインマウスの樹立にも成功し、pCriMGETシステムと比較してノックイン効率が向上した(Ishibashi R., et al. Sci. Rep. 2022)。加えて、複数の遺伝子座において様々な長さの長鎖ドナーDNAテンプレートを用いた遺伝子ターゲッティング個体の作出に成功した。pCriMGET_9-12aシステムの開発により、CRISPR-Cas9だけではなくCRISPR-Cas12aを用いても効率的な長鎖ドナーDNAテンプレートのターゲッティングが可能となった。
The purpose of this study is to develop new CRISPR-Cas DNA technology using long-locked DNA technology. This year's and previous research has led to the development of pCriMGET (plasmid of synthetic CRISPR coded RNA target sequence-equipped donor plasmid mediated gene targeting)システムをimproved, CRISPR-Cas12a used and left子ターゲッティングにも対応したpCriMGET_9-12aシステムを开発した. The core of the fertilized egg is pCriMGET_9-12aドナープラスミド、Cas12aタンパク性、 Target crRNA for cleavage およびpCriMGET_9-12a crRNA for cleavage をマイクロインジェクション法により Importし、Rosa26 legacy subdomainにFull length 5.5kbのLong lockドナーDNAテンプレートをCRISPR-Cas12a was successfully established using いて insertion and したノックインマウスの.また、Hipp11 domain にFull length 5kb long lock ドナーDNA テンプレートをCRISPR-Cas9をinsert いてしたノックインマウスのEstablishment of successし、pCriMGETシステムとComparison of efficiencyがUPした(Ishibashi R., et al. Sci. Rep. 2022). Add えて、plural の缝子肖において様々な长さの长 lock ドナーDNAテンプレートを Use the いた弝子ターゲッティング individual のに Success した. pCriMGET_9-12aシステムの开発により、CRISPR-Cas9だけではなくCRISP R-Cas12a is made possible by using long-lasting DNA locks with high efficiency.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
CRISPR-Cas9およびCRISPR-Cas12aによるin vivo切断型高汎用性遺伝子ターゲッティングplasmidの開発
使用 CRISPR-Cas9 和 CRISPR-Cas12a 开发体内可切割的高度通用的基因靶向质粒
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Ishibashi Riki;Maki Ritsuko;Kitano Satsuki;Miyachi Hitoshi;Toyoshima Fumiko;石橋 理基
  • 通讯作者:
    石橋 理基
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石橋 理基其他文献

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