权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

核移行型ドナーDNAプラスミドによる新規遺伝子ターゲティング技術の開発

使用核转位供体 DNA 质粒开发新的基因靶向技术

基本信息

批准号：
22K15029
负责人：
石橋理基
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、長鎖ドナーDNAテンプレートの核移行を介した新規CRISPR-Cas遺伝子ターゲッティング技術の開発である。本年度は、以前の研究にて開発したpCriMGET（plasmid of synthetic CRISPR coded RNA target sequence-equipped donor plasmid mediated gene targeting）システムを改良し、CRISPR-Cas12aを用いた遺伝子ターゲッティングにも対応したpCriMGET_9-12aシステムを開発した。マウス受精卵の核にpCriMGET_9-12aドナープラスミド、Cas12aタンパク質、標的ゲノム切断用crRNAおよびpCriMGET_9-12a切断用crRNAをマイクロインジェクション法により導入し、Rosa26遺伝子領域に全長5.5kbの長鎖ドナーDNAテンプレートをCRISPR-Cas12aを用いて挿入したノックインマウスの樹立に成功した。また、Hipp11領域に全長5kbの長鎖ドナーDNAテンプレートをCRISPR-Cas9を用いて挿入したノックインマウスの樹立にも成功し、pCriMGETシステムと比較してノックイン効率が向上した（Ishibashi R., et al. Sci. Rep. 2022）。加えて、複数の遺伝子座において様々な長さの長鎖ドナーDNAテンプレートを用いた遺伝子ターゲッティング個体の作出に成功した。pCriMGET_9-12aシステムの開発により、CRISPR-Cas9だけではなくCRISPR-Cas12aを用いても効率的な長鎖ドナーDNAテンプレートのターゲッティングが可能となった。

The purpose of this study is to conduct a long-term nuclear transfer program to introduce the new regulations of CRISPR-Cas, such as CRISPR-Cas, technology, and technology. This year, previous research programs have been conducted on pCriMGET (plasmid of synthetic CRISPR coded RNA target sequence-equipped donor plasmid mediated gene targeting), and CRISPR-Cas12a has been used to improve the performance of the pCriMGET_9-12a system. PCriMGET _ 9-12a zygotes were transected with pCriMGET _ 9-12a, pCriMGET _ 9-12a was cut off by crRNA, and pCriMGET _ 9-12a was cut off by crRNA. The whole length of 5.5kb in the sub-field of the zygote was successfully transected, and the whole length of the 5.5kb in the subfield of the zygote was successfully transected. The full length of the 5kb and Hipp11 fields has led to an increase in the overall performance of the CRISPR-Cas9 (Ishibashi R., et al.). Sci. Rep. 2022). In addition, the number of copies can be added, and the number of copies will be overridden. In this case, you will be able to make a successful response by using the DNA system to make a success. In pCriMGET_9-12a, there is a significant difference between CRISPR-Cas9 and CRISPR-Cas12a in terms of the operating temperature and the operating rate of the DNA.