スプライシング抑制を介した遺伝子発現キャンセル機構の解明

通过剪接抑制阐明基因表达取消机制

• 批准号: 22K15034
• 负责人: 幡野 敦
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15034/
• 关键词: クロマチン; プロテオミクス; スプライシング; 定量プロテオミクス; クロマチンプロテオミクス; 遺伝子発現制御

これまでの研究からインスリン刺激によりスプライセオソームがクロマチンから離脱する現象を見出した。このスプライセオソームの離脱はスプライシング効率の低下を引き起こすことが想定され、mRNAの成熟抑制を介した遺伝子発現制御を行っている可能性が考えられる。そこで本研究ではインスリン刺激によるスプライシングの離脱が遺伝子発現に与える影響を評価し、その分子基盤の解明を目指す。まずスプライシングの離脱が遺伝子発現に与える影響を評価するためにスプライセオソームに含まれるSRSF1が実際に遺伝子のゲノム領域に結合するかをChIPを用いて検討した。intron-exon junctionを含む複数の領域に関してPrimerを設計してインスリン刺激による結合の変化を定量的に計測した。またインスリン応答遺伝子の成熟mRNAの安定性およびスプライシング速度を調べるため、スプライシング阻害剤や転写阻害剤を組み合わせた実験系を用いて検討した。成熟mRNAの安定性に関してはより生理的条件での検討を行うため、RNAにBrUを取り込ませる実験によりスプライシング前のRNAと成熟RNAの分解速度を比較した。さらにスプライシングに着目した理由となったクロマチンプロテオミクス（ChEP-DIA法）に関しても実験系を見直し再解析を行った。この方法の開発によりより網羅的に転写因子を含むクロマチン関連分子およびスプライシング関連分子の動態解析が可能となった。これらのデータをもとに遺伝子発現キャンセリングの制御分子機構の解明が進むことが期待できる。

This study reveals the phenomenon of separation from natural stimuli. The possibility of gene expression inhibition by mRNA maturation is examined. This study aims to evaluate the effects of different stimuli on gene expression and molecular structure. SRSF1 is an effective method for evaluating the impact of the chIP on the development and integration of the chIP. The intron-exon junction contains multiple domain related primers designed to stimulate and quantify The stability of mature mRNA in the gene expression vector is regulated by the gene expression inhibitor and the gene expression inhibitor. The stability of mature mRNA is related to physiological conditions, and the decomposition rate of RNA and mature RNA is compared. The reason for this is that the system is analyzed again by the ChEP-DIA method The development of this method involves the analysis of the molecular dynamics of the relevant molecules. The development of new technologies and new technologies

项目成果

定量プロテオミクスによるERK活性化不均一性の解析

通过定量蛋白质组学分析 ERK 激活异质性

• 发表时间: 2022
• 作者: 田邊ひかる;幡野敦;松本 雅記
• 通讯作者: 松本 雅記

Transomic analysis of insulin-dependent transcriptional regulation using chromatin proteomics

使用染色质蛋白质组学对胰岛素依赖性转录调控进行转染色体分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 幡野敦;松本 雅記
• 通讯作者: 松本 雅記

細胞溶解が不要なトリプシン消化法の開発

开发不需要细胞裂解的胰蛋白酶消化方法

• 发表时间: 2022
• 作者: 幡野敦;松本 雅記
• 通讯作者: 松本 雅記