リン酸化定量プロテオミクスによるTGF-βシグナル伝達機構の解明

通过定量磷酸化蛋白质组学阐明TGF-β信号转导机制

基本信息

  • 批准号:
    11J02739
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2011
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2011 至 2013
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

これまでTGFβの下流として知られているcalcineurinの基質候補をプロテオミクス解析により多数同定したこれらのcalcineurinの新規基質候補のより生理的刺激下でのリン酸化の変動を明らかにるため抗原刺激のリン酸化プロテオミクス解析との統合を行った。この解祈によりcalcineurinの基質候補分子の中には抗原刺激後脱リン酸化されず、変動しないものやリン酸化されるものが存在することが分かった。これはおそらくカルシウム刺激より複雑なリン酸化経路の活性化が抗原刺激により起こっており、基質候補がcalcineurin以外のリン酸化制御を受けることを示唆した。そこでこのリン酸化制御を行う分子を同定ために新規基質候補の一つであるItpkbに着目した解析を行った。詳細な解析によりItpkbは抗原刺激により脱強くリン酸化されることが明らかとなった。そこでこのリン酸化酵素の同定を試みた。配列情報よりErkがリン酸化を担っている可能性が示唆され、阻害剤を用いた検証を行ったところErkによりやはりリン酸化されていた。さらにErkとcalcineurinは抗原刺激時に同時に活性化することよリン酸化と脱リン酸化を拮抗的に行っているのではないかと考え抗原刺激時に阻害剤を加えることで検証を行った。予想通りErkとcalcineurinはItpkbのリン酸化を拮抗的に制御していた。最後に我々はこの拮抗的な制御がItpkbに特異的な現象なのか、それともたくさんの基質候補で起こっている現象なのかを検証すべくリン酸化プロテオミクスを用いて網羅的に検証した。おどろいたことに多くの基質候補がErkとcalcineurinに拮抗的に制御されていた。以上よりErkとcalcineurinが細胞内で拮抗的に制御するリン酸化のネットワークをプロテオミクス解析を複数重ねることで同定した。
こ れ ま で TGF beta の obscene と し て know ら れ て い る calcineurin の matrix alternate を プ ロ テ オ ミ ク ス parsing に よ り most be し た こ れ ら の calcineurin の new rules matrix alternate の よ り physiological stimuli で の リ ン acidification の - move を Ming ら か に る た め antigen stimulation の リ ン acidification プ ロ テ オ ミ ク ス solution Analyze と と to integrate を rows った. こ の solution qi に よ り calcineurin の matrix alternate molecular の に は antigen stimulation after take off リ ン acidification さ れ ず, - し な い も の や リ ン acidification さ れ る も の が exist す る こ と が points か っ た. こ れ は お そ ら く カ ル シ ウ ム stimulus よ り complex 雑 な リ ン acidification 経 road の activeness が antigen stimulation に よ り up こ っ て お り, matrix alternate が calcineurin outside の リ ン acidification royal を by け る こ と を in stopping し た. そ こ で こ の リ ン acidification ride on を を う molecules with fixed た め に new rules matrix alternate の a つ で あ る Itpkb に with mesh し た parsing line を っ た. Detailed な analysis によ によ Itpkb <s:1> antigen stimulation によ <s:1> destrengthening くリ <s:1> acidification される とが とが Ming ら となった となった Youdaoplaceholder0 そ で で リ リ <s:1> acidifying enzyme <s:1> を test みた. With columns intelligence よ り Erk が リ ン acidification を bear っ て い が る possibility in stopping さ れ, resistance against tonic を い た 検 line card を っ た と こ ろ Erk に よ り や は り リ ン acidification さ れ て い た. さ ら に Erk と calcineurin は antigen stimulation に simultaneously に activeness す る こ と よ リ ン acidification と リ off ン acidification を antagonism against に line っ て い る の で は な い か と え antigen stimulation test に resistance against tonic を plus え る こ と で 検 line card を っ た. To imagine the に control of <s:1> Erkとcalcineurin <s:1> Itpkb リ <s:1> acidification を antagonism, <s:1> て た た た た. Finally に I 々 は こ の antagonism of な suppression が Itpkb に specific な phenomenon な の か, そ れ と も た く さ ん の matrix alternate で up こ っ て い る phenomenon な の か を 検 card す べ く リ ン acidification プ ロ テ オ ミ ク ス を with い て snare of に 検 card し た. More than お ど ろ い た こ と に く の matrix alternate が Erk と calcineurin に antagonism against the に suppression さ れ て い た. Above よ り Erk と calcineurin で antagonism of に が cell suppression す る リ ン acidification の ネ ッ ト ワ ー ク を プ ロ テ オ ミ ク ス parsing を plural heavy ね る こ と で with fixed し た.

项目成果

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使用定量磷酸蛋白质组学阐明胸腺细胞抗原刺激的信号转导机制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2013
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    藤井俊博;他Telescope Arrray Collaboration;T.Fujii for the Telescope Array Collaboration;藤井俊博;幡野 敦
  • 通讯作者:
    幡野 敦
Quantitative phosphoproteomic analysis of calmodulin-dependent calcium signaling
钙调蛋白依赖性钙信号传导的定量磷酸蛋白质组学分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2013
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    藤井俊博;他Telescope Arrray Collaboration;T.Fujii for the Telescope Array Collaboration;藤井俊博;幡野 敦;幡野 敦
  • 通讯作者:
    幡野 敦
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通过定量磷酸化蛋白质组学全面搜索钙调神经磷酸酶底物
  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    藤井俊博;他Telescope Arrray Collaboration;T.Fujii for the Telescope Array Collaboration;藤井俊博;幡野 敦;幡野 敦;幡野 敦
  • 通讯作者:
    幡野 敦
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  • 通讯作者:
    Shuwen Zhou・Shigeru Kawakami・Yuriko Higuchi・Fumiyoshi Yamashita・Mitsuru Hashida
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  • 通讯作者:
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