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SunTag法による脂肪細胞種固有の分化決定因子のエピゲノム制御への挑戦

使用 SunTag 方法挑战脂肪细胞类型特异性分化因子的表观基因组控制

基本信息

批准号：
22K15081
负责人：
鈴木智大
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

2022年度は、計画①「aP2レポーター遺伝子およびSunTag-SETDB1発現細胞の作製」、および、計画②「SunTag-SETDB1によるH3K9me3を介した標的遺伝子の発現制御」の確認を予定していた。計画①では、白色脂肪前駆細胞 (3T3-L1細胞) のレポーター細胞株の樹立を試みた。網羅的遺伝子発現解析により、aP2 (Fabp4) 発現は脂肪細胞分化の比較的初期から増加することがわかっていたため、レポーターとしてはaP2プロモーターの下流にGFPを配置した配列 (paP2-GFP) を利用することとした。樹立に際し、paP2-GFPを導入したpiggyBacプラスミドを作製し，トランスポゼースプラスミドと共に4D-Nucleofectorで導入して脂肪前駆細胞に安定発現させた後、薬剤選択によってレポーター配列が導入された細胞を選別した。得られた安定発現株を脂肪細胞分化させてGFP蛍光を経時的に観察したところ、GFP蛍光は分化開始4日後から明確に確認され、分化開始8日後でも観察された。したがって、当初の目的通りレポーター細胞株の樹立に成功した。一方、細胞間でGFP蛍光にばらつきが認められたため、当初の予定を変更し、レポーター細胞をクローニングすることとした。現在、クローニング細胞を19ライン樹立し、優良な細胞株を選定中である。計画②に関しては、本年度は実施を見送り来年度に行うこととした。

In 2022, the confirmation of the plan ① "aP2 gene transfer and SunTag-SETDB1 discovery cell production" and the plan ② "SunTag-SETDB1 gene transfer and H3K9 me3 discovery" was scheduled. Project 1: Establishment of white adipose cells (3T3-L1 cells) and white adipose cells (3T3-L1 cells) Analysis of the expression of the protein in the network, aP2 (Fabp4) expression, and the initial stage of adipocyte differentiation, increase in the expression of GFP in the downstream of aP2 expression, increase in the expression of GFP in the downstream of aP2 expression. When establishing the system, paP2-GFP was introduced into the piggyBac cells, and the cells were selected from 4D-Nucleofector introduced into the adipocytes. After 4 days of differentiation, GFP cells were detected. The cell line was successfully established. A side, cell to cell GFP light to recognize the beginning of the predetermined change, change the cell to the beginning of the change Now, the cell line is 19 years old, and the cell line is selected. The plan is to send a message to the next year.