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SLCOトランスポーターをコアとするチャネル活性発現機構の解明

阐明以SLCO转运蛋白为中心的通道活性表达机制

基本信息

批准号：
22K15295
负责人：
中村吉伸
金额：
$ 3万
依托单位：
Takasaki University of Health and Welfare
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15295/
关键词：
SLCO2A1 Maxi-Cl トランスポーターチャネルプロスタグランジン

项目摘要

生体内イオンの細胞膜透過を担うトランスポーターとチャネルは構造、性質的に似て非なる膜タンパク質であるが、中には両方の活性を持つタンパク質がいくつか報告されている。しかし、その活性発現調節機構や二重活性を有する生理学的意義については解明されていない例が多い。本研究では、プロスタグランジン (PG) トランスポーターおよびMaxi-Clチャネルの二重機能を持つことが近年新たに明らかとなったSLCO2A1について、その活性発現機構と生理学的意義の解明、さらにはチャネル活性を有する他SLCO分子の探索を目的に研究を行っている。2022年度は、SLCO2A1のトランスポーター/チャネル活性使い分け機構の解明を目的に検討を行った。これまでに、SLCO2A1のチャネル活性が報告されたマウス乳腺由来C127細胞ではPG輸送とMaxi-Clの両活性が発現すること、また本細胞にMaxi-Clを活性化させる低張刺激を与えてもPG輸送活性がほとんど変化しないことを見出した。さらに、Maxi-Cl活性化に必須なアクセサリータンパク質ANXA2/S100A10を遺伝子欠損させてもPG輸送機能が維持されたことから、これらはPG輸送に必須でないことも明らかになった。したがって、SLCO2A1はPGトランスポーターとして常時機能しながら、特定の刺激に応じてMaxi-Cl活性を発現する膜タンパク質であることが示された。このほか2022年度は、ANXA2/S100A10以外のMaxi-Clアクセサリータンパク質探索のためのFLAGタグ結合SLCO2A1発現細胞を構築した。抗FLAG抗体を用いた免疫沈降法により、少なくともSLCO2A1とANXA2の結合が確認できたため、今後は免疫沈降サンプルについてプロテオミクス解析を実施し、未知のMaxi-Clアクセサリータンパク質探索および相互作用メカニズムの解明に取り組む予定である。

In vivo, the cell membrane is made through the membrane, which is similar to that of the membrane, the activity of the membrane, the activity of the membrane, the membrane, the membrane, The mechanism of double activity has the meaning of physiology. It is clear that there are many cases of dysentery. The purpose of this study is to understand the meaning of physiology in recent years, to understand the meaning of physiology in recent years, to understand the meaning of physiology and to explore the activity of SLCO molecules. In this study, we have been able to understand the meaning of physiology in recent years, we have been able to understand the meaning of physiology in recent years. The purpose of the study is to explore the molecular biology of Maxi-Cl. In the year 2022, the activity of SLCO2A1 and SLCO2A1 enabled the branch organization to understand the purpose of the operation. Reports on activity, SLCO2A1 activity, breast origin, C127 cells, PG, Maxi-Cl, activity, activation, Maxi-Cl activation, low stimulation and PG delivery. It is necessary to ensure that the Maxi-Cl is active and that the ANXA2/S100A10 transmitter is not able to maintain the performance of the PG transport, and that the PG must be properly activated. The results showed that the membrane was affected by the activity of Maxi-Cl, the activity of SLCO2A1, the activity of SLCO2A1 and the activity of SLCO2A1. In the year 2022, outside of ANXA2/S100A10, we can find out how to use the combination of Maxi-Cl, FLAG and SLCO2A1 to find out how to find out how to do this. Anti-FLAG antibodies were detected by immunoprecipitation assay, SLCO2A1 ANXA2 assay combined with immunoprecipitation assay to confirm the immune response, and in the future, the immune sedimentation assay was used to analyze the immune response, and the unknown Maxi-Cl antibody was used to explore the interaction between the two groups.