SLCOトランスポーターをコアとするチャネル活性発現機構の解明

阐明以SLCO转运蛋白为中心的通道活性表达机制

基本信息

批准号：
22K15295
负责人：
中村吉伸
金额：
$ 3万
依托单位：
Takasaki University of Health and Welfare
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15295/
关键词：
SLCO2A1 Maxi-Cl トランスポーターチャネルプロスタグランジン

项目摘要

生体内イオンの細胞膜透過を担うトランスポーターとチャネルは構造、性質的に似て非なる膜タンパク質であるが、中には両方の活性を持つタンパク質がいくつか報告されている。しかし、その活性発現調節機構や二重活性を有する生理学的意義については解明されていない例が多い。本研究では、プロスタグランジン (PG) トランスポーターおよびMaxi-Clチャネルの二重機能を持つことが近年新たに明らかとなったSLCO2A1について、その活性発現機構と生理学的意義の解明、さらにはチャネル活性を有する他SLCO分子の探索を目的に研究を行っている。2022年度は、SLCO2A1のトランスポーター/チャネル活性使い分け機構の解明を目的に検討を行った。これまでに、SLCO2A1のチャネル活性が報告されたマウス乳腺由来C127細胞ではPG輸送とMaxi-Clの両活性が発現すること、また本細胞にMaxi-Clを活性化させる低張刺激を与えてもPG輸送活性がほとんど変化しないことを見出した。さらに、Maxi-Cl活性化に必須なアクセサリータンパク質ANXA2/S100A10を遺伝子欠損させてもPG輸送機能が維持されたことから、これらはPG輸送に必須でないことも明らかになった。したがって、SLCO2A1はPGトランスポーターとして常時機能しながら、特定の刺激に応じてMaxi-Cl活性を発現する膜タンパク質であることが示された。このほか2022年度は、ANXA2/S100A10以外のMaxi-Clアクセサリータンパク質探索のためのFLAGタグ結合SLCO2A1発現細胞を構築した。抗FLAG抗体を用いた免疫沈降法により、少なくともSLCO2A1とANXA2の結合が確認できたため、今後は免疫沈降サンプルについてプロテオミクス解析を実施し、未知のMaxi-Clアクセサリータンパク質探索および相互作用メカニズムの解明に取り組む予定である。

负责体内离子细胞膜渗透的转运蛋白和通道是结构和性质相似的膜蛋白，但已经报道了一些具有两种活性的蛋白质。但是，许多病例尚未阐明其活性表达调节机理和双重活性的生理意义。在这项研究中，我们进行了对SLCO2A1的研究，该研究最近揭示了前列腺素（PG）转运蛋白和Maxi-CL通道的双重功能，目的是阐明其活性表达机制和生理意义，并搜索其他具有通道活性的SLCO分子。在2022财年，进行了研究，目的是阐明在SLCO2A1中使用不同转运蛋白/通道活性的机制。我们已经发现，PG转运和最大CL活性均在源自小鼠乳腺的C127细胞中表达，即使在将低渗刺激激活Maxi-CL向细胞中激活时，其PG转运活性也几乎不会改变。此外，据揭示了即使在对最大CL活化至关重要的辅助蛋白Axcha2/S100A10时，PG传输功能也是如此明显，因为它对于PG运输不是必不可少的。因此，已经表明，SLCO2A1是一种膜蛋白，在响应于特定刺激的响应时表达最大CL活性，它不断充当PG转运蛋白。此外，在2022年，构建了表达标志性的SLCO2A1细胞，以搜索除Anxa2/S100A10以外的Maxi-CL辅助蛋白。由于使用抗FLAG抗体通过免疫沉淀来证实SLCO2A1和ANXA2之间的结合，因此我们计划将来对免疫沉淀样品进行蛋白质组学分析，以探索未知的Maxi-CL辅助蛋白并阐明相互作用机制。