ecDNAによるRTKの腫瘍内不均一性ならびに治療抵抗性機序解明と新規治療法探索

利用ecDNA阐明RTK的瘤内异质性和治疗耐药机制并寻找新的治疗方法

• 批准号: 22K15433
• 负责人: 金山 和樹
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Suzuka University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15433/
• 关键词: Extrachromosomal DNA; Receptor tyrosine kinase; 腫瘍内不均一性; FGFR2; シングルセルクローニング; CGHアレイ; FISH; 治療抵抗性クローン

Receptor tyrosine kinase(以下RTK)阻害剤に対する治療抵抗性機序の1つに腫瘍内不均一性が報告されているが、腫瘍内不均一性の形成機序や治療抵抗性のメカニズムは十分に解明されていない。本研究課題で着目しているExtrachromosomal DNA(以下ecDNA)は環状構造を示し、セントロメアを欠くというユニークな特徴を持つことが知られている。近年、ecDNA数は腫瘍細胞間で大きく異なっており、数理モデルにより腫瘍内遺伝的不均一性を促進させることが報告された。しかし、腫瘍進展に重要となるRTKが組み込まれたecDNAが腫瘍細胞間で不均一に分離されるかどうかについては十分に明らかにされておらず、また、RTKが組み込まれたecDNAの不均一な分離とRTKタンパク発現の不均一性ならびに治療抵抗性への直接的な関連性についても明らかにされていない。本年度は、RTKの1つであるFGFR2が組み込まれたecDNAをもつ胃癌細胞株(SNU-16)を使用し、腫瘍細胞間におけるRTKの不均一性ならびに薬剤感受性解析を行った。SNU-16をシングルセルクローニングによって5つのクローンを単離し、各クローン内のFGFR2遺伝子のコピー数を解析した結果、クローン内で大きく変動していた。また、CGHアレイとFISHで解析した結果、コピー数に加えてecDNAの構造がクローン間で異なっており、タンパク発現、FGFR2阻害剤への感受性に差が認められた。さらに、単離したクローンからFGFR2阻害剤に対する治療抵抗性クローンを作製し、CGHアレイとFISHでecDNAを解析した結果、ecDNAの構造が変化していた。これらの結果よりRTKが組み込まれたecDNAは動的に変化することでRTK阻害剤に対する治療抵抗性を獲得することが示唆され現在論文投稿の準備を進めている。

Receptor tyrosine kinase (hereinafter RTK) blocks the mechanism of treatment resistance and reports on intra-tumor heterogeneity.れているが、The formation mechanism of heterogeneity within the tumor is のメカニズムは十に解明されていない. The purpose of this research topic is Extrachromosomal DNA (hereinafter referred to as ecDNA) has a circular structure and a circular structure. In recent years, the heterogeneity of ecDNA numbers among tumor cells and the heterogeneity of mathematical DNA in tumor cells have been reported. It is important for tumor progression and tumor progression.でUneven separationされるかどうかについては十に明らかにされておらず、また、 RTK's group and ecDNA's uneven separation and RTK's uneven appearance一性ならびにTreatment resistance へのDirect なrelated sex についても明らかにされていない. This year, RTKの1つであるFGFR2がみ込まれたecDNAをもつ gastric cancer cell line (SN U-16) Use and analyze the sensitivity of RTK inhomogeneity between tumor cells. SNU-16をシングルセルクローニングによって5つのクローンを単里し、each クローン内のFGFR2缝子のコピーnumberをanalyticしたRESULTS, クローン内で大きく変动していた.また, CGH アレイとFISH でanalysis した results, コピーnumber にplus えてecDNA のstructure がクローン马でdifferentなっており, タンパク発appear, FGFR2 blocks the sensitivity of FGFR2 and is recognized められた.さらに、単利したクローンからFGFR2 blocker 剤に対するtreatment resistance クローンをproducedし、 The results of CGH analysis and FISH analysis of ecDNA and the structure and structure of ecDNA were analyzed.これらのRESULTSよりRTKが集团み込まれたecDNAは的に変化することでRTKblock Harmful treatment resistance を Acquisition す る こ と が 出 さ れ Now the paper submission の を progress め て い る.