エボラウイルス分泌型糖タンパク質sGPの病原性発現分子機構の解明

埃博拉病毒分泌型糖蛋白sGP致病性表达分子机制的阐明

• 批准号: 22K15473
• 负责人: 古山 若呼
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15473/
• 关键词: エボラウイルス; sGP

エボラウイルスは、ヒトを含む霊長類に高い致死率を伴う重篤なエボラウイルス病を引き起こすが、現時点における有効な予防、治療法は限定的である。さらに、エボラウイルスはその病原性の高さから高度安全実験施設(BSL-4)での取り扱いが義務付けられているため、野生型エボラウイルスを用いた研究は極めて制限されており、その病原性発現因子に関する知見についても限られている。エボラウイルスが保持するネガティブ1本鎖RNAゲノムには、7種のウイルス構造タンパク質がコードされている。エボラウイルスがコードする糖タンパク質(GP)遺伝子には7つのアデニン(7A)から成るEditing siteが存在する。このサイトにアデニン(A)の挿入が生じフレームシフトが起こることによって分泌型糖タンパク質(sGP: 7A)と表面糖タンパク質(GP: 8A)が産生する。エボラウイルスGPはエボラウイルス粒子上に発現する唯一のタンパク質であり、ウイルスの細胞侵入において重要な役割を担うことから、研究が進められている。一方、全ての糖タンパク質遺伝子に由来する遺伝子産物の中で7割以上の発現を呈するsGPの機能については未知である。本研究では、エボラウイルスが分泌する糖タンパク質sGPの病原性発現機構ならびに分泌機構の解明を目的として以下の検討を行った。第一に、sGPの細胞内可視化システムの構築を行った。次に各種細胞小器官マーカーを指標として、sGPの細胞内動態を、共焦点顕微鏡下で免疫染色法により経時的に観察した。また、米国BSL-4施設において、エボラウイルスの標的細胞種の１つである樹状細胞（ヒト由来）に野生型エボラウイルスを感染し、培養上清中に分泌されるsGPの濃度をELISA法にて測定した。さらに、Tag付加sGPを哺乳類細胞に発現し、共沈物について質量分析解析を行った結果、複数の宿主因子を同定した。

For example, if you have a high mortality rate, you may have a high mortality rate. If you may have a high mortality rate. In addition, BSL-4 is a highly pathogenic and highly safe facility designed for use with wild-type pathogens. There are 7 kinds of RNA structures in the genome. The Editing site exists for the 7-point deletion (7A) of the GP file. The production of the secretory carbohydrate (GP: 7A) and the surface carbohydrate (GP: 8A) is the result of the formation of the secretory carbohydrate (GP: 7A). It is important to study and research the unique nature of cell invasion. The origin of a protein, the origin of a protein, the occurrence of a protein product, and the function of a protein are unknown. This study aims to investigate the mechanisms of pathogenicity and secretion of the secreted proteins. The first step is to construct an intracellular visualization system for sGP. In addition, the intracellular dynamics of sGP and the immune staining method under confocal microscope were observed. The concentration of sGP secreted from the culture supernatant was determined by ELISA. The results of mass analysis and identification of multiple host factors were analyzed.

项目成果

米国BSL-4施設における高病原性ウイルスに関する研究紹介

美国BSL-4设施高致病性病毒研究简介

• 发表时间: 2023
• 作者: Subsomwong Phawinee;Doohan Dalla;Fauzia Kartika Afrida;Akada Junko;Matsumoto Takashi;Yee Than Than;Htet Kyaw;Waskito Langgeng Agung;Tuan Vo Phuoc;Uchida Tomohisa;Matsuhisa Takeshi;Yamaoka Yoshio;Subsomwong Phawinee;Subsomwong Phawinee;Subsomwong Phawinee;Subsomwong Phawinee;古山若呼
• 通讯作者: 古山若呼