Ewing肉腫に対するHLA-A24拘束性ネオアンチゲン特異的免疫細胞療法の開発

针对尤文肉瘤的 HLA-A24 限制性新抗原特异性免疫细胞疗法的开发

• 批准号: 22K15612
• 负责人: 石井 翠
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15612/
• 关键词: iPSC; CTL; Ewing肉腫; 免疫細胞療法; iPS細胞

今年度は、健常人ドナーから改変ペプチドを用いて細胞傷害性T細胞(CTL)の誘導を行い、neoantigen 特異的なCTL誘導が可能で、MHC テトラマーで検出可能なエピトープの候補を絞ることを念頭に研究を進めた。Ewing肉腫の融合遺伝子EWS/FLI1の融合部分を標的とする改変エピトープの候補を検討した。HLA-A24とEWS/FLI1 融合部分の改変アミノ酸列のin silico解析の結果より、9個のアミノ酸配列のうち、先頭のセリン(S)と末尾のチロシン(Y)を変更することによって適合性及び結合性が上がると予測される6種類の抗原ペプチドを選択して作製した。上記のペプチド6種を用いて健常人ドナーからCTLを誘導した。CTL誘導は、最初に健常人ドナーから採血して1週間かけて適切なメディウム及びサイトカインを添加することによって抗原提示細胞を誘導する。1週間後に同一ドナーから採血し末梢血単核球と抗原ペプチドを提示させた抗原提示細胞とを共培養することによりCTLへ誘導する。ここでも適切なメディウム及びサイトカインを適宜添加した。抗原提示細胞との共培養は合計2回行った。誘導したCTLを用いてELISPOT assayを行った。6つのうち2つの改変ペプチドによるCTL誘導において、ネガティブコントロールと比較してINFγの産生を認める結果となった。一方で、HLA-A24のQuick switchテトラマーでの解析でも非常に僅かではあるがCD8陽性、Tetramaer陽性となる細胞を認めた。

This year, the induction of cytotoxic T cells (CTL) in healthy individuals and neoantigen specific CTL induction is possible, and MHC CTL induction is possible. EWS/FLI1 fusion part of the target to change the candidate to discuss HLA-A24 and EWS/FLI1 fusion part of the modified acid sequence in silica analysis results, 9 of the modified acid sequence, the first (S) and the last (Y) to change the suitability and binding between the prediction, the selection of 6 kinds of antigen selection system. The above six kinds of selection methods are used to induce CTL. CTL induction is initiated by the addition of appropriate antigen-indicating cells to healthy individuals within 1 week of blood collection. One week later, the same blood sample was collected and the antigen was detected. The antigen was detected and the CTL was induced in co-culture. This is the right time to add the right information. Antigen suggests that cell co-culture totals 2 cycles. The ELISPOT assay was used to induce CTL. 6. The change in the number of CTLs induced by the change in the number of CTLs One side, HLA-A24 Quick switch, analysis, very only CD8 positive, Tetramaer positive cells recognized.