Regulatory mechanism and functional analysis of transcription factor Forkhead box F2 expression in esophageal cancer.

食管癌转录因子Forkhead box F2表达的调控机制及功能分析

• 批准号: 22K15975
• 负责人: 東森 啓
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15975/
• 关键词: FOXF2; 食道癌; Wnt/βカテニン; 上皮間葉移行

食道癌細胞株(TE1,TE4,TE5,TE6,TE8,TE9,TE10,TE11,TE14,TE15)と及び食道正常細胞株(Het-1A)とヒト正常食道生検検体を用いて、癌部と非癌部でのFOXF2発現をreal time PCR法で検討した。ヒト食道検体やHet-1Aに比べてTE6,8,10,15などの食道癌細胞株でFOXF2発現が低下していることを確認した。また、食道癌細胞株と食道正常細胞株およびヒト食道検体でのメチル化の有無をバイサルファイトシーケンス解析で確認した。各検体から抽出したDNAをバイサルファイト処理後、プロモーター領域のGCサイトのメチル化の程度をシークエンス解析し比較した。ヒト食道正常検体ではプロモーター領域のメチル化は認めなかったが、食道癌細胞株では高頻度にメチル化が起こっていることを確認した。しかしFOXF2発現とメチル化の程度の相関は低く、メチル化以外のエピジェネテッィクな制御機構が関与している可能性が示唆された。また表在食道癌内視鏡的粘膜下層剥離術後のホルマリン検体を用いて、レーザーマイクロダイセクション法により、癌近傍正常組織と癌組織でのFOXF2発現を検討した。抽出条件の検討により高品質のRNA抽出が可能であったが、癌近傍正常部と癌部での明らかなFOXF2発現の差は認めなかった。今後は、内視鏡的切除病変だけでなく、外科手術標本での検討も行っていく予定である。また、FOXF2蛋白発現についても免疫染色法で検討を行い、非癌部に比べて癌部でFOXF2発現が低下していることをDAB染色法により確認した。

Esophageal cancer cell lines (TE1, TE4, TE5, TE6, TE8, TE9, TE10, TE11, TE14, TE15) and esophageal normal cell lines (Het-1A) were detected by real-time PCR. It was confirmed that FOXF2 expression in esophageal cancer cell lines Het-1A was lower than that in TE6,8,10 and 15. The presence or absence of esophageal cancer cell lines and esophageal normal cell lines was confirmed by analysis of the presence or absence of esophageal cancer cells. After the extraction of DNA from each sample, the analysis of the degree of transformation of GC in the field was carried out. Esophageal cancer cell lines were identified with high frequency. The correlation between FOXF2 occurrence and the degree of polarization is low, and the probability of polarization is high. This study was conducted to investigate the expression of FOXF2 in normal and cancerous tissues adjacent to esophageal cancer after endoscopic submucosal dissection. Extraction conditions: high quality RNA extraction is possible, cancer is near normal, cancer is near normal, and FOXF2 is present. In the future, endoscopic resection of the disease will be determined by surgery. FOXF2 protein expression was detected by immunostaining and confirmed by DAB staining in non-cancerous parts compared with cancerous parts.