Molecular profiling and elucidation of the mechanism regarding small cell carcinoma transformation in EGFR-positive lung cancer

EGFR阳性肺癌小细胞癌转化的分子谱分析及机制阐明

• 批准号: 22K16205
• 负责人: 内堀 健
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Japanese Foundation for Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16205/
• 关键词: SCLC転化; EGFR遺伝子変異陽性肺癌; EGFR-TKI; 小細胞癌転化

EGFR変異陽性肺癌において、小細胞癌（SCLC）転化によってEGFRチロシンキナーゼ阻害剤（EGFR-TKI）に耐性を生じた症例の臨床サンプルを用いてRNAseqを行った。ASCL1、NeuroD1、POU2F3などのNEマーカーの発現パターンを解析中であり、標準的なSCLCとの差を評価できることが期待される。また、NEマーカーのパターン解析については、新鮮凍結検体のmRNA解析が標準ではあるが、コンスタントにそのような検体を採取できるとは限らない。ASCL1、NEUROD1などの評価は免疫染色（IHC) でも可能という知見が蓄積されており、RNAseqを行えないサンプルではIHCによる評価を試みる予定であり、解析対象を拡充することが可能と考えられる。SCLC転化の際には、先行研究によるとRB1とTP53の機能喪失が特徴であると理解されてきたため、その点についてもIHC等による評価を組み合わせて検証する。ヒト検体を用いた検討に加えて、EGFR変異肺がんモデルマウスを用いた検討も行った。マウスEGFR-del19変異を発現するマウス肺がん細胞株を用いてCrispr-cas9のシステムにより、RbとTP53のノックアウトを導入した細胞を樹立した。その細胞を同系マウスに移植してEGFR-TKIで治療し、耐性となり再増大してきた腫瘍を取得し、耐性メカニズム解析を進めている。実臨床においても、EGFR-TKI耐性時にSCLC転化と腺癌のままの細胞が同一領域に混在した症例や、SCLC転化症例に対してプラチナ製剤+ICIを使用した症例をなど経験し、引き続き解析対象を蓄積している。SCLC転化はEGFR-TKI耐性の5-10%で生じるが、細胞生物学的な特徴は十分に解明されておらず、その最適治療が確立していない。以上の結果がその解決に寄与すると期待される。

使用EGFR突变阳性肺癌对小细胞癌（SCLC）对EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）具有抗性的病例临床样本进行RNASEQ。目前正在分析NE标记物（例如ASCL1，NeuroD1和POU2F3）等NE标记的表达模式，可以评估可以评估与标准SCLC的差异。此外，对于NE标记的模式分析，对新鲜冷冻标本的mRNA分析是标准的，但是不能不断收集此类标本。有很多知识是，可以使用免疫染色（IHC）对ASCL1，NeuroD1等进行评估，并且我们计划尝试评估无法使用IHC执行RNASEQ的样本，这是可以扩大分析目标的数量。先前的研究被认为是RB1和TP53功能丧失的特征，因此还将通过使用IHC等评估来检查这一点。除了使用人类标本的研究外，还进行了使用EGFR突变肺癌模型小鼠的研究。使用RB和TP53敲除引入的细胞使用小鼠肺癌细胞系使用CRISPR-CAS9系统表达小鼠EGFR-DEL19突变。将细胞移植到同烯型小鼠中，并用EGFR-TKI处理，并且获得了耐药性并越来越增加的肿瘤，并进行了耐药机制分析。在实际的临床实践中，我们经历了在EGFR-TKI耐药性的情况下，在同一区域中混合细胞的SCLC转化率和腺癌的病例，并且在SCLC转化对SCLC抗性且分析持续积累的情况下，使用了铂制剂和ICI。 SCLC转化发生在5-10％的EGFR-TKI耐药性中，但是尚未完全了解细胞生物学特征，并且尚未确定最佳治疗。上述结果预计将有助于解决方案。