食道腺癌の発癌促進作用がある菌の同定とその発癌促進機構の解明

食管腺癌促癌细菌的鉴定及促癌机制的阐明

• 批准号: 22K16510
• 负责人: 奥村 慎太郎
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16510/
• 关键词: 食道腺癌; バレット食道; 細胞老化; 酪酸; 歯周病原性細菌

本研究の目的は、大腸癌発癌促進作用があるPorphyromonas gingivalis, Porphyromomas asaccharolytica, Fusobacterium nucleatumが食道腺癌の発癌を促進するかどうかを検討することである。われわれはその発癌メカニズムとして、3菌種が食道腺癌の発生母地であるBarrett食道上皮細胞に細胞老化を誘導し、さらには染色体不安定を惹起することに注目している。まず、この3菌種共通の代謝産物である酪酸が、Barrett食道上皮細胞株 (CP-A細胞)に細胞老化を誘導するかを検討した。500μM, 1mM, 3mM, 5mMの各濃度の酪酸をCP-A細胞に9日間投与し、細胞数カウントを行った。その結果、1mM以上で酪酸がCP-A細胞の細胞増殖を安定的に抑制することが分かった。また、RT-qPCRにて細胞老化マーカーの遺伝子発現の変化を調べた結果、酪酸投与によりp21、IL-1β、IL-6の発現上昇およびLamin B1の発現低下が認められた。一方でp16の発現上昇は認められなかった。また、DNAダメージ応答について蛍光免疫染色で評価した結果、酪酸投与によりCP-A細胞にDNAダメージ応答が誘導されることがわかった。以上より酪酸はCP-A細胞に細胞老化を誘導することがわかった。また、令和5年度以降に行う予定の動物実験に先立ち、野生型マウスに食道空腸吻合を施した逆流性食道炎モデルマウスを作成した。食道腺組織中に菌が存在するかどうかを検討するために、食道腺癌手術検体のFFPE標本を用いたin situ hybridizationは、倫理審査の手続きが遅れたことにより、まだ解析を開始できていない。令和5年度に解析を開始する予定である。

这项研究的目的是研究具有促进结肠癌的作用的卟啉单胞菌，卟啉单瘤和核细菌核细菌是否促进了食管腺癌的致癌作用。我们关注其致癌发育的机制，即三种物种在巴雷特的食管上皮细胞中诱导细胞衰老，这些细胞是食管腺癌的来源，进而诱导染色体不稳定性。首先，我们研究了这三个物种常见的代谢物丁酸是否会诱导Barrett食管上皮细胞系（CP-A细胞）中的细胞衰老。丁酸在每种浓度为500μm，1 mm，3 mm和5 mM的丁酸均向CP-A细胞施用9天，并进行细胞计数。结果，发现丁酸稳定地抑制了CP-A细胞1 mm或更高的CP-A细胞的细胞增殖。此外，通过RT-QPCR检查了细胞衰老标记的基因表达的变化，丁酸丁酸的给药显示出p21，IL-1β和IL-6的表达增加，lamin B1表达降低。另一方面，未观察到p16的表达增加。此外，使用荧光免疫染色评估了DNA损伤反应，发现丁酸酸的给药会诱导CP-A细胞中的DNA损伤反应。从上面发现丁酸诱导CP-A细胞中的细胞衰老。此外，在计划在2023年之后进行动物实验之前，创建了一种反流食管炎的小鼠模型，其中野生型小鼠接受了食管的空肠造口术。为了确定食管腺组织中是否存在细菌，使用手术食管腺癌标本的FFPE标本对原位杂交进行分析，这是由于道德审查程序中的延迟而尚未开始。该分析计划于2023年开始。