膵癌における制御性Bリンパ球とアデノシン産生酵素（CD39、CD73）の検討

胰腺癌中调节性 B 淋巴细胞和腺苷生成酶（CD39、CD73）的检查

• 批准号: 22K16532
• 负责人: 村上 裕樹
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16532/
• 关键词: 腫瘍免疫

本研究は、膵癌患者における免疫抑制能を有する制御性Bリンパ球およびアデノシン代謝酵素であるCD73、CD39の発現と、腫瘍の進展や転移に対する影響について検討を行うことを目的としている。実際の研究として、切除膵組織検体を用いて膵癌細胞、組織浸潤リンパ球におけるCD39およびCD73の発現を免疫組織学的染色にて検討を開始した。現在、条件検討を終了しており、目標症例数の染色を行った上で、予後や化学療法の効果との関連を検討する。また、膵癌患者の末梢血、癌組織、非癌部組織の制御性Bリンパ球およびCD73、CD39発現Bリンパ球の頻度をフローサイトメトリー(FCM) にて比較検討する。現在、末梢血における制御性Bリンパ球(CD19+CD24hiCD27+と仮定)とCD73、CD39発現Bリンパ球の染色と、細胞内染色を用いた免疫抑制性サイトカインであるIL-10の染色の検討を行っている。併せて、切除組織を用いたFCMを行うため、組織の分解および染色の条件検討を行っている。制御性Bリンパ球が産生するTGF-βが制御性Tリンパ球の分化を促進することが報告されている。そこで上記と同様のサンプルを用いて制御性Tリンパ球（CD4+Foxp3+）の頻度をFCMにて検討し、制御性Bリンパ球と制御性Tリンパ球の関連を検討する。制御性Bリンパ球の機能解析（サイトカイン産生能）として、膵癌患者の末梢血を用いて、制御性Bリンパ球(CD19+CD24hiCD27+ と仮定)とCD73、CD39発現Bリンパ球をソーティングし、IL-10およびTGF-β産生を細胞内染色およびELISAにて測定する。

这项研究旨在研究CD73和CD39的表达，这些CD73和CD39是免疫抑制性的调节性B淋巴细胞和腺苷代谢酶的表达，以及它们对胰腺癌患者肿瘤进展和转移的影响。作为一项实践研究，我们开始使用免疫组织学染色使用切除的胰腺组织标本来研究胰腺癌细胞和组织浸润淋巴细胞中CD39和CD73的表达。有条件的研究现已完成，在染色目标数量后，我们将检查预后和与化学疗法有效性的关联。此外，将比较并通过流式细胞仪（FCM）进行比较并检查调节性B淋巴细胞和CD73和CD39表达B淋巴细胞的频率。目前，我们正在研究周围血液中调节性B淋巴细胞（假设CD19+CD24HICD27+）和外周血中表达CD39的B淋巴细胞的染色，以及使用使用内细胞内的染色。另外，为了使用切除的组织进行FCM，正在研究组织分解和染色的条件。据报道，调节性B淋巴细胞产生的TGF-β促进了调节性T淋巴细胞的分化。因此，使用与上述相同的样品，使用FCM检查了调节性T淋巴细胞（CD4+FOXP3+）的频率，并检查了调节性B淋巴细胞与调节T淋巴细胞之间的关系。 As a functional analysis of regulatory B lymphocytes (cytokine production ability), peripheral blood from a patient with pancreatic cancer is used to sort regulatory B lymphocytes (assuming that CD19+CD24hiCD27+) and CD73 and CD39-expressing B lymphocytes, and IL-10 and TGF-β production are measured by intracellular staining and Elisa。