ゲノム編集技術を用いた悪性胸膜中皮腫におけるBAP1の機能解析

利用基因组编辑技术分析BAP1在恶性胸膜间皮瘤中的功能

• 批准号: 22K16569
• 负责人: 佐藤 博紀
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16569/
• 关键词: 悪性胸膜中皮腫; Crispr/Cas9ゲノム編集技術; ドラッグスクリーニング

悪性胸膜中皮腫（MPM）において腫瘍抑制遺伝子として知られるBAP1の体細胞変異による不活性化は、代表的な遺伝子異常として知られている。その治療標的としての可能性を検討するための第一段階として、Crispr/Cas9ゲノム編集システムによるBAP1ノックアウト細胞株の樹立を目指してきた。Crispr/Cas9ゲノム編集に必要なガイドRNAのデザイン、ベクター作成を行い、これまでに上皮型MPM細胞株であるHmeso、肉腫型MPM細胞株であるH2373、二相型MPM細胞株であるJMNを用いて、BAP1ノックアウト細胞株を作成し単離することに成功した。それぞれの樹立モデルにおいて、mRNAレベルおよびタンパク質レベルでBAP1が確実にノックアウトされていることを確認済である。現在、これらの前臨床モデルを用いて、BAP1のMPMにおける機能解析を進めている。RNAiによる予備実験を行っており、BAP1のノックダウンにより増殖能が阻害される可能性が示唆されている。現在、BAP1をノックアウトすることで細胞形態、増殖能、転移遊走能、細胞周期の進行、DNA修復機構等に及ぼす影響を各種アッセイを用いて検討している最中である。さらにノックアウト株と親株を用いた、ドラッグスクリーニングなどの網羅的解析も進行中である。

MPM is a tumor suppressor gene. It is known that BAP1 is not activated in somatic cells. It represents an abnormal gene. The first stage of the study of the possibility of therapeutic targets, Crispr/Cas9, was directed to the establishment of BAP1 cell lines in the context of the compilation. Crispr/Cas9 was successfully used to compile the necessary RNA sequences and construct the epithelial MPM cell line Hmeso, the sarcomatous MPM cell line H2373, the biphasic MPM cell line JMN, and the BAP1 cell line. The expression of BAP1 in the mRNA of the gene is confirmed by the expression of BAP1. Now, the pre-clinical application of BAP1 MPM is in progress. RNAi preparation is carried out in the presence of BAP1 and the possibility of its propagation being blocked is indicated. Now, BAP1 can be used to study cell morphology, proliferation, migration, cell cycle progression, DNA repair mechanism, etc. The analysis of the network is in progress.