ゲノム編集技術を用いた悪性胸膜中皮腫におけるBAP1の機能解析

利用基因组编辑技术分析BAP1在恶性胸膜间皮瘤中的功能

• 批准号: 22K16569
• 负责人: 佐藤 博紀
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16569/
• 关键词: 悪性胸膜中皮腫; Crispr/Cas9ゲノム編集技術; ドラッグスクリーニング

悪性胸膜中皮腫（MPM）において腫瘍抑制遺伝子として知られるBAP1の体細胞変異による不活性化は、代表的な遺伝子異常として知られている。その治療標的としての可能性を検討するための第一段階として、Crispr/Cas9ゲノム編集システムによるBAP1ノックアウト細胞株の樹立を目指してきた。Crispr/Cas9ゲノム編集に必要なガイドRNAのデザイン、ベクター作成を行い、これまでに上皮型MPM細胞株であるHmeso、肉腫型MPM細胞株であるH2373、二相型MPM細胞株であるJMNを用いて、BAP1ノックアウト細胞株を作成し単離することに成功した。それぞれの樹立モデルにおいて、mRNAレベルおよびタンパク質レベルでBAP1が確実にノックアウトされていることを確認済である。現在、これらの前臨床モデルを用いて、BAP1のMPMにおける機能解析を進めている。RNAiによる予備実験を行っており、BAP1のノックダウンにより増殖能が阻害される可能性が示唆されている。現在、BAP1をノックアウトすることで細胞形態、増殖能、転移遊走能、細胞周期の進行、DNA修復機構等に及ぼす影響を各種アッセイを用いて検討している最中である。さらにノックアウト株と親株を用いた、ドラッグスクリーニングなどの網羅的解析も進行中である。

悪 sex skin is swollen (MPM) in pleural に お い て swollen sores inhibit heritage 伝 son と し て know ら れ る BAP1 の somatic - different に よ る な of inactive は, representative 伝 child abnormal と し て know ら れ て い る. そ の therapeutic target と し て の possibility を beg す 検 る た め の first Duan Jie と し て, Crispr/Cas9 ゲ ノ compiling シ ム ス テ ム に よ る BAP1 ノ ッ ク ア ウ ト cell lines の set を refers し て き た. Compiling に Crispr/Cas9 ゲ ノ ム necessary な ガ イ ド RNA の デ ザ イ ン, ベ ク タ ー を い, consummate こ れ ま で に epithelial cell line type MPM で あ る Hmeso type, meat is swollen MPM cell lines で あ る H2373 cell lines, two phase MPM で あ る JMN を with い て, BAP1 ノ ッ ク ア ウ ト cell lines を し consummate Youdaoplaceholder0 away from する とに とに success た. そ れ ぞ れ の set モ デ ル に お い て, mRNA レ ベ ル お よ び タ ン パ ク qualitative レ ベ ル で BAP1 が indeed be に ノ ッ ク ア ウ ト さ れ て い る こ と を confirm 済 で あ る. Now, the preclinical モデ モデ れら を is used to analyze the を て, BAP1 and MPMにおける functions into めて る る る. RNAi に よ る reserve be 験 を line っ て お り, BAP1 の ノ ッ ク ダ ウ ン に よ り rights can yield が resistance against さ れ が る possibility in stopping さ れ て い る. Now, BAP1 を ノ ッ ク ア ウ ト す る こ と で cell morphology, rights can yield, planning to move to, cell cycle, DNA repair institutions for の に and ぼ す を various ア ッ セ イ を with い て beg し 検 て い る in most で あ る. さ ら に ノ ッ ク ア ウ ト seedlings を と kiss with い た, ド ラ ッ グ ス ク リ ー ニ ン グ な ど の snare parsing も underway で あ る.