ゲノム編集技術を用いた悪性胸膜中皮腫におけるBAP1の機能解析

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悪性胸膜中皮腫（MPM）において腫瘍抑制遺伝子として知られるBAP1の体細胞変異による不活性化は、代表的な遺伝子異常として知られている。その治療標的としての可能性を検討するための第一段階として、Crispr/Cas9ゲノム編集システムによるBAP1ノックアウト細胞株の樹立を目指してきた。Crispr/Cas9ゲノム編集に必要なガイドRNAのデザイン、ベクター作成を行い、これまでに上皮型MPM細胞株であるHmeso、肉腫型MPM細胞株であるH2373、二相型MPM細胞株であるJMNを用いて、BAP1ノックアウト細胞株を作成し単離することに成功した。それぞれの樹立モデルにおいて、mRNAレベルおよびタンパク質レベルでBAP1が確実にノックアウトされていることを確認済である。現在、これらの前臨床モデルを用いて、BAP1のMPMにおける機能解析を進めている。RNAiによる予備実験を行っており、BAP1のノックダウンにより増殖能が阻害される可能性が示唆されている。現在、BAP1をノックアウトすることで細胞形態、増殖能、転移遊走能、細胞周期の進行、DNA修復機構等に及ぼす影響を各種アッセイを用いて検討している最中である。さらにノックアウト株と親株を用いた、ドラッグスクリーニングなどの網羅的解析も進行中である。