オルガノイドーシングルセル解析法によるグリオーマ血管擬態の分子機構解明

利用类器官-单细胞分析方法阐明胶质瘤血管拟态的分子机制

• 批准号: 22K16692
• 负责人: 山下 真治
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16692/
• 关键词: 血管擬態; オルガノイドモデル; tube formation assay; スタチン; Vascular mimicry; Glioblastoma; Bevacizumab

本研究は膠芽腫等の悪性脳腫瘍で認められる、血管新生阻害剤の耐性に寄与する血管擬態（VM ; vasculogenic mimicry)の形成機序を解明することをその目的とする。実験手法として、膠芽腫の組織検体より採取した細胞を用いオルガノイドモデルを樹立し、同腫瘍塊内に存在するVMの形成に重要と考えられているGSC(glioma stem cell)を蛍光物質でマークして、HUVEC細胞にて作成した血管内皮モデルへの遊走、血管構造の形成を観察することで機序解明を進める事を計画している。現時点で、オルガノイドモデルが安定した形で作成できておらず、計画した解析が行えていない状況にある。そこで、市販の膠芽腫細胞株及び当施設にて樹立した膠芽腫細胞株を用いtube formation assayを用いることで、VMの阻害効果を有する実用的な薬剤の発見とその機序解明につき検討を行っている。候補薬剤として他の癌腫でtubeの形成抑制が確認されているスタチン（シンバスタチン）を用いた実験を行っており、複数の膠芽腫細胞株（U87MG, U251)においてtubeの形成阻害が確認できている。現在、その分子メカニズムの解明に取り組んでいる。TGF-βとそのシグナル伝達に関与する分子に注目し、発現解析を行った後、強制発現株等を用いた検証を計画している。このin vitroでの研究を進める事で、オルガノイドモデルが安定して作成できた際の実験の大幅な進捗に繋がるものと考えている。

The aim of this study was to elucidate the mechanism of vascular mimicry (VM) formation in the development of collagen and other vascular lesions, and to elucidate the resistance to angiogenesis inhibitors. In order to understand the mechanism of VM formation, it is important to examine the GSC(glioma stem cell), fluorescent substance, HUVEC cell, vascular endothelial cell migration and vascular structure formation. At this point, the optical display is stable and ready to be made, and the analysis of the plan is in progress. The development of commercially available tumor cell lines and the application of tube formation assays in the establishment of tumor cell lines and VM inhibition effects are discussed in detail. The inhibition of tube formation in multiple tumor cell lines (U87MG, U251) was confirmed. Now, the molecular TGF-β protein expression is related to molecular attention, expression analysis, stress expression, etc. The research on this issue in vitro has been carried out in a number of ways.