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CRISPR-Cas9スクリーニングによる卵巣奇形腫悪性転化の新規治療の開発

利用 CRISPR-Cas9 筛选开发卵巢畸胎瘤恶性转化的新疗法

基本信息

批准号：
22K16831
负责人：
玉内学志
金额：
$ 3万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16831/
关键词：
卵巣癌 CRISPR-Cas9 ノックアウトスクリーニング患者腫瘍由来モデル

项目摘要

【ノックアウトスクリーニングの進捗状況】当研究室で樹立した卵巣奇形腫悪性転化の細胞株NOSCC1を用いて、CRISPR-Cas9ノックアウトスクリーニングを実施した。NOSCC1に対してCas9タンパクを導入後、sgRNAライブラリを発現するレンチウィルスをインフェクションさせた多様な遺伝子プロファイルを持つ細胞集団を作成し、スクリーニングの選択圧としてシスプラチン添加を行った。セレクション完了後にgDNAを抽出し、生存細胞に取り込まれたsgRNA配列のアンプリコンシーケンスを行い、リファレンス細胞との比較を行った。ネガティブスクリーニングの結果、25個の遺伝子が見出された。創薬可能性の観点から絞り込みを行い、10個の遺伝子が新規治療標的遺伝子として見出された。10個の遺伝子について、細胞株を用いたノックダウン実験を行い、さらに4種類の遺伝子へと選別を行った。【薬効試験の準備状況】当研究室では卵巣奇形腫悪性転化の患者腫瘍由来モデル (PDX) も樹立しており、PDXマウス腫瘍を分割して多数のヌードマウスに再移植することで、多数の擬似的な担癌患者集団を作成することが可能であり、これらのマウスへの投薬によってヒトの腫瘍に対する抗腫瘍効を検証できる。新たに1種のPDXが樹立され、腫瘍増大の自然史を含めた予備的データ取得を完了しており、新規標的遺伝子に対する阻害剤投与試験のフェーズを速やかに実行する体制が構築されつつある。

When the cell line NOSCC1 was established in the laboratory, CRISPR-Cas9 was implemented. After NOSCC1 is introduced into Cas9, sgRNA gene expression is generated, and the cell population is created, selected, and added. After the completion of the study, gDNA was extracted from the living cells, and the sgRNA sequence was compared with the living cells. The results of the survey showed that 25 samples were found in the survey. The possibility of creating a new treatment target for 10 patients was discussed. 10 strains were selected from among the 4 strains. [Preparation of the test] When the laboratory established PDX, PDX, and tumor segmentation, most of the tumor was retransplanted, and most of the simulated cancer patient pools were created, it was possible to identify anti-tumor evidence for the administration of PDX and tumor. The establishment of a new type of PDX, the acquisition of data prepared for the natural history of increased tumors, and the rapid and practical implementation of the system for preventing and testing the legacy of new standards have been completed.