次世代シーケンシング解析による子宮内膜再生microRNAの同定と創薬基盤開発

通过下一代测序分析鉴定子宫内膜再生 microRNA 和药物发现平台开发

• 批准号: 22K16847
• 负责人: 柴田 磨己
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16847/
• 关键词: microRNA; 着床不全; NGS; モデルマウス; 脂肪幹細胞; 脂肪組織由来幹細胞; 次世代シーケンシング

本研究は脂肪幹細胞上清に含まれる、子宮内膜着床不全を治癒するmicroRNAを同定することを目的とし、1) Small RNA-Seq解析、mRNA-Seq解析による子宮内膜再生microRNAの同定、2) ヒト子宮内膜間質細胞と子宮内膜菲薄化マウスを用いたmicroRNAの子宮内膜再生能評価、3) ボナック核酸の作製と子宮内膜菲薄化マウスに対する薬効、細胞内動態解析を実施する。細胞は継代を重ねるごとに老化し、分化能力が低下する。マウス脂肪幹細胞もまた、継代を重ね、分化能力が低下するほど、子宮内膜再生能力が低下することが予測される。本年度は、高い分化能力を保持した3継代目、および分化能力が低下した20継代目におけるマウス脂肪幹細胞の上清をsmall RNA-Seq解析することで、3継代目の上清にて有意に発現上昇しているmicroRNAを10種程度同定することに成功した。また、子宮内膜菲薄化マウス作製のための最適なエタノール投与量を決定し、さらに、マウス子宮内膜のHE染色画像から子宮内膜の厚みを測定する方法を決定したことで、microRNAの子宮内膜再生効果を正確に検証する方法を確立した。来年度以降は、モデルマウスの子宮組織をRNA-Seq解析し、その発現パターンと同定したmicroRNAの関係性を確認すると共に、実際に、同定したmicroRNAを子宮内膜菲薄化モデルマウスへ投与することで、子宮内膜の厚さ、および血管新生関連遺伝子の発現、受精卵の着床率を調べることで、子宮内膜再生効果を検証する。

The purpose of this study is to identify microRNAs contained in adipose stem cell supernatants that can cure endometrial implantation failure, 1) identify microRNA for endometrial regeneration in Small RNA-Seq analysis and mRNA-Seq analysis, 2) evaluate the endometrial regeneration potential of microRNAs used in endometrial stromal cells and endometrial thinning cells, 3) evaluate the processing of nucleic acid and its role in endometrial thinning, Intracellular dynamic resolution is implemented. The cells are aging and the ability to differentiate is low. Adipose stem cells have low differentiation ability, low endometrial regeneration ability, and low reproductive capacity. This year, the ability to differentiate was maintained at a high level for 3 generations, and the ability to differentiate was reduced for 20 generations. The supernatant of adipose stem cells was analyzed by small RNA-Seq. The supernatant of adipose stem cells was intentionally increased for 3 generations. The microRNA level was stable for 10 degrees. To determine the optimal dosage of microRNA for endometrial tissue preparation, to determine the method for endometrial tissue thickness determination by HE staining, and to establish the method for accurate identification of microRNA for endometrial tissue regeneration. In the coming years, RNA-Seq analysis of uterine tissue, identification of microRNA expression, identification of microRNA expression, endometrial thinning, endometrial thickness, development of angiogenesis-related genes, regulation of implantation rate of fertilized eggs, and identification of endometrial regeneration results have been performed.