マイクロRNAの強制発現によるヒト歯系幹細胞の単離とそのインスリン分泌誘導性

通过强制表达 microRNA 分离人牙齿干细胞及其胰岛素分泌诱导能力

• 批准号: 22K17081
• 负责人: 村上 智哉
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Asahi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K17081/
• 关键词: iPS細胞; 乳歯歯髄細胞; マイクロRNA; mirPS細胞; インスリン分泌細胞; 抗腫瘍性; 高効率な初期化; 乳歯; miRNA; iTS細胞

iPS細胞は再生研究において活発な研究が行われている。その作製にあたっては山中因子と呼ばれる４種の初期化遺伝子の遺伝子導入が必要であるが、その遺伝子導入効率は高くなく、また腫瘍形成のリスクが残存している。これらの問題を解決すべく、近年ではマイクロRNA(miRNA)を使用したiPS細胞の作製技術が開発され、注目が大きくなっている。miRNA導入により作製された、iPS細胞様細胞(mirPS細胞)は、従来のiPS細胞に比較してリプログラミング効率が20%程度と高効率であり、更に腫瘍形成能が低いとされている。本研究では、このmiRNAと乳歯歯髄細胞(HDDPC)を用いることでmirPS細胞を樹立し、さらにインスリン分泌細胞の分化誘導を行うことにより、より効率の高く安全な再生療法の開発を目的とする。まずは、mirPS細胞を作製するために、HDDPCに対してpLOVE-miR302/367（リプログラミングmiRNA）、pT-EGFP（緑蛍光タンパク）、pT-pac（puromycin耐性遺伝子）、pTrans（PB transposase発現ベクター）、をNeon Transfection Systemによって遺伝子導入した。また導入後にpuromycinにて選別して、生じたコロニーを拾い上げて安定株を得た。現在、緑蛍光の確認、ALP染色による未分化性の確認、PCRによるゲノム解析を行っている。

iPS cell regeneration research and development research. 4 kinds of early stage gene introduction are necessary, and the gene introduction rate is high. In recent years, the use of miRNA in iPS cell production technology has been developed, and great attention has been paid to it. miRNA introduced into iPS cells (mirPS cells) was compared with iPS cells, iPS cells showed a high efficiency rate of 20%, iPS cells showed a low efficiency rate of 20%, and iPS cells showed a low efficiency rate of tumor formation. The aim of this study is to establish and induce the differentiation of miRNA secretory cells in breast dentition cells (HDDPC) and to develop regenerative therapy with high and safe rates. In the control of mirPS cells, HDDPC supports pLOVE-miR302/367, pT-EGFP, pT-pac, pTrans and Neon Transfection System. After the introduction of puromycin, the plant was selected and stabilized. Now, green light confirmation, ALP staining, undifferentiated confirmation, PCR, and analysis are performed.