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Elucidation of cartilage substrate destruction mechanism of ANGPTL2 and establishment of new therapeutic agent for Temporomandibular joint osteoarthritis

阐明ANGPTL2软骨基质破坏机制及颞下颌关节骨关节炎新治疗药物的建立

基本信息

批准号：
22K17253
负责人：
西山沙由理
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K17253/
关键词：
アンジオポエチン様因子変形性顎関節症軟骨滑膜

项目摘要

TMJ-OAにおけるANGPTL2による軟骨破壊メカニズムを解析することを目的に、ヒト滑膜細胞を使用し検討を行っている。まず、ヒト滑膜細胞に対してANGPTL2を添加し、炎症反応、基質分解酵素およびMMPsの内因性阻害因子であるTIMPsの遺伝子発現量の変化について定量PCR検討を行った。炎症反応マーカーであるIL-1β、IL-6の遺伝子発現は添加後1時間で有意に上昇し、3、6、12、24、48時間まで断時的に減少した。TNF-αは１、3時間まで優位に上昇し続け、6、12、24、48時間まで断時的に減少した。基質分解酵素であるMMP3、9、13は添加後1、3、6、12、24、48時間で優位に上昇し続けた。MMPsの内因性阻害因子であるTIMP1、2、3は添加後6時間で優位に減少した。これらの結果を基に、LILRB2中和抗体およびIntegrinα5β1中和抗体を各々添加し、抗炎症効果および基質破壊抑制効果を検討した。ヒト滑膜細胞に中和抗体を添加し、12時間後にANGPTL2を添加、6時間後に細胞を回収した。その結果、ANGPTL2により有意に亢進した炎症マーカーおよび基質分解酵素が有意に抑制された。現在、ANGPTL2添加下においてMMPs分泌機構の阻害がMAPKs、NF-kβ、AKT、JAK/STATシグナルに及ぼす影響についてwestern blot解析を行っている。今後、MMPs分泌機構の阻害剤が滑膜細胞の細胞増殖、細胞死へ与える影響について検討する。動物実験については、ラット下顎頭高負荷モデルを用いた検討を開始したところである。阻害剤を顎関節部にシリンジにて局所投与し、２か月後の下顎頭形態をX線写真およびマイクロCTを用いて、三次元的に解析していく。

TMJ-OA and ANGPTL2 are used to analyze cartilage tissue and synovial cells. In addition, quantitative PCR analysis was conducted to investigate the changes in the genetic expression of TIMPs due to the addition of ANGPTL2 to synovial cells, inflammatory reactions, matrixolytic enzymes, and endogenous inhibitors of MMPs. The expression of IL-1β and IL-6 in inflammatory response increased significantly at 1 time point, and decreased at 3, 6, 12, 24, and 48 time points. TNF-α increased at time 1 and 3 and decreased at time 6, 12, 24 and 48. MMP3, 9 and 13 increased significantly at 1, 3, 6, 12, 24 and 48 hours after addition. TIMP1, TIMP 2, TIMP 3 and TIMP 3 decreased 6 times after addition. The results of this study include the addition of LILRB2 neutralizing antibody and Integrinα5β1 neutralizing antibody, anti-inflammatory effect and matrix disruption inhibitory effect. Synovial cells were neutralized after 12 hours of ANGPTL2 addition and 6 hours of cell recovery. As a result, ANGPTL2 is intentionally activated and matrix decomposing enzymes are intentionally inhibited. Now, ANGPTL2 addition to the MMPs secretion mechanism of the inhibition of MAPKs, NF-kβ, AKT, JAK/STAT cluster and the impact of Western blot analysis In the future, the inhibitors of MMPs secretion mechanism will be discussed in cell proliferation, cell death and other effects of synovial cells. The animal has a high load on its chin. X-ray photo of jaw joint part of the joint part of the jaw and the shape of the jaw head after 2 months