Elucidation of cartilage substrate destruction mechanism of ANGPTL2 and establishment of new therapeutic agent for Temporomandibular joint osteoarthritis

阐明ANGPTL2软骨基质破坏机制及颞下颌关节骨关节炎新治疗药物的建立

基本信息

批准号：
22K17253
负责人：
西山沙由理
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K17253/
关键词：
アンジオポエチン様因子変形性顎関節症軟骨滑膜

项目摘要

TMJ-OAにおけるANGPTL2による軟骨破壊メカニズムを解析することを目的に、ヒト滑膜細胞を使用し検討を行っている。まず、ヒト滑膜細胞に対してANGPTL2を添加し、炎症反応、基質分解酵素およびMMPsの内因性阻害因子であるTIMPsの遺伝子発現量の変化について定量PCR検討を行った。炎症反応マーカーであるIL-1β、IL-6の遺伝子発現は添加後1時間で有意に上昇し、3、6、12、24、48時間まで断時的に減少した。TNF-αは１、3時間まで優位に上昇し続け、6、12、24、48時間まで断時的に減少した。基質分解酵素であるMMP3、9、13は添加後1、3、6、12、24、48時間で優位に上昇し続けた。MMPsの内因性阻害因子であるTIMP1、2、3は添加後6時間で優位に減少した。これらの結果を基に、LILRB2中和抗体およびIntegrinα5β1中和抗体を各々添加し、抗炎症効果および基質破壊抑制効果を検討した。ヒト滑膜細胞に中和抗体を添加し、12時間後にANGPTL2を添加、6時間後に細胞を回収した。その結果、ANGPTL2により有意に亢進した炎症マーカーおよび基質分解酵素が有意に抑制された。現在、ANGPTL2添加下においてMMPs分泌機構の阻害がMAPKs、NF-kβ、AKT、JAK/STATシグナルに及ぼす影響についてwestern blot解析を行っている。今後、MMPs分泌機構の阻害剤が滑膜細胞の細胞増殖、細胞死へ与える影響について検討する。動物実験については、ラット下顎頭高負荷モデルを用いた検討を開始したところである。阻害剤を顎関節部にシリンジにて局所投与し、２か月後の下顎頭形態をX線写真およびマイクロCTを用いて、三次元的に解析していく。

我们正在使用人类滑膜细胞进行研究，以分析TMJ-OA中ANGPTL2的软骨破坏机制。首先，将ANGPTL2添加到人类滑膜细胞中，并研究了定量PCR的TIMP基因表达水平的变化，炎症反应，底物降解酶和MMPS的内源性抑制剂。炎症反应标记IL-1β和IL-6的基因表达在加入后1小时显着增加，并停用至3、6、12、24和48小时。 TNF-α继续升高到主要上升1至3小时，并瞬时下降至6、12、24和48小时。加入后1、3、6、12、24和48小时，底物降解酶mmp3、9、13继续上升至主要率。 MMP，TIMP1、2和3的内源性抑制剂在加入后6小时后主要减少。基于这些结果，加入了中和抗体中和抗体中和抗体，并研究了抗炎作用和底物破坏抑制作用。将中和抗体添加到人类滑膜细胞中，在12小时后加入Angptl2，并在6小时后收获细胞。结果，ANGPTL2显着增强的炎症标记和底物降解酶得到了显着抑制。当前，进行蛋白质印迹分析以确定在添加ANGPTL2下抑制MMPS分泌机制对MAPK，NF-Kβ，AKT和JAK/STAT信号的抑制作用。将来，我们将研究MMPS分泌机制抑制剂对滑膜细胞细胞增殖和细胞死亡的影响。关于动物实验，我们刚刚开始使用高负载的大鼠下颌头模型进行研究。抑制剂通过注射器局部对颞下颌关节进行施用，两个月后，使用X光片和Microct对下颌头形态进行三维分析。