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Elucidation of cartilage substrate destruction mechanism of ANGPTL2 and establishment of new therapeutic agent for Temporomandibular joint osteoarthritis

阐明ANGPTL2软骨基质破坏机制及颞下颌关节骨关节炎新治疗药物的建立

基本信息

批准号：
22K17253
负责人：
西山沙由理
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K17253/
关键词：
アンジオポエチン様因子変形性顎関節症軟骨滑膜

项目摘要

TMJ-OAにおけるANGPTL2による軟骨破壊メカニズムを解析することを目的に、ヒト滑膜細胞を使用し検討を行っている。まず、ヒト滑膜細胞に対してANGPTL2を添加し、炎症反応、基質分解酵素およびMMPsの内因性阻害因子であるTIMPsの遺伝子発現量の変化について定量PCR検討を行った。炎症反応マーカーであるIL-1β、IL-6の遺伝子発現は添加後1時間で有意に上昇し、3、6、12、24、48時間まで断時的に減少した。TNF-αは１、3時間まで優位に上昇し続け、6、12、24、48時間まで断時的に減少した。基質分解酵素であるMMP3、9、13は添加後1、3、6、12、24、48時間で優位に上昇し続けた。MMPsの内因性阻害因子であるTIMP1、2、3は添加後6時間で優位に減少した。これらの結果を基に、LILRB2中和抗体およびIntegrinα5β1中和抗体を各々添加し、抗炎症効果および基質破壊抑制効果を検討した。ヒト滑膜細胞に中和抗体を添加し、12時間後にANGPTL2を添加、6時間後に細胞を回収した。その結果、ANGPTL2により有意に亢進した炎症マーカーおよび基質分解酵素が有意に抑制された。現在、ANGPTL2添加下においてMMPs分泌機構の阻害がMAPKs、NF-kβ、AKT、JAK/STATシグナルに及ぼす影響についてwestern blot解析を行っている。今後、MMPs分泌機構の阻害剤が滑膜細胞の細胞増殖、細胞死へ与える影響について検討する。動物実験については、ラット下顎頭高負荷モデルを用いた検討を開始したところである。阻害剤を顎関節部にシリンジにて局所投与し、２か月後の下顎頭形態をX線写真およびマイクロCTを用いて、三次元的に解析していく。

TMJ - OA における ANGPTL2 による cartilage broken 壊メカニズムを parsing することを purpose に, ヒをト synovial cells using し検 line for をっている. まず, ヒト synovial cell にし seaborne て ANGPTL2 を add し, inflammation, anti 応, matrix decomposition enzyme および MMPs の endogenous resistance against factor である TIMPs の posthumous son 伝発 amount is の variations change につい検 for line をって quantitative PCR た. Anti inflammation 応マーカーである beta, IL - 6, IL - 1 の伝 son 発は now add after 1 time で intentionally に rise し, 3, 6, 12, 24 and 48 time まで broken when に reduce した. TNF-α <s:1> at times 1 and 3, the まで superior position に increases by <s:1> 続け, and at times 6, 12, 24, and 48, the に at まで breaks decreases by たた. After the addition of matrix-decomposing enzymes であるMMP3, 9, and 13, the で superior position に increased at 1, 3, 6, 12, 24, and 48 times, and the 続けた続けた. After the addition of the endogenous hindrance factors であるTIMP1, 2, and 3 である in MMPs, the で superior position に decreased by <s:1> た at 6 time. これらの results をに, LILRB2 neutralizing antibody および Integrin alpha 5 beta 1 neutralizing antibody を each 々 add し, anti-inflammatory unseen fruit および matrix break 壊 inhibition of unseen fruit を beg し検た. Youdaoplaceholder0 synovial cells に neutralizing antibody を added を, にANGPTL2を added after 12 hours, に cells を reproduced た after 6 hours. その results, ANGPTL2 により intentionally に hyperthyroidism した inflammation マーカーおよびが intentionally に matrix decomposition enzyme inhibition された. Now, under ANGPTL2 add において MMPs secretion institutions の resistance against が MAPKs, NF - k beta, AKT, JAK/STAT シグナルに and ぼす influence について western blot parsing line をっている. In the future, the MMPs secretory mechanism <s:1> inhibitor が synovial cell <e:1> proliferation, cell death へ and える effects on に, and て検 are discussed する. Animals be 験については, ラット jaw head high load モデルを with いたを検 please start したところである. Masato resistance against tonic を joint department にシリンジにて bureau cast with かし and 2 months の chin head shape を X-ray photo およびマイクロ CT を with いて, three yuan に analytic していく.