老化に伴いⅡ型肺胞上皮細胞に発現するCideaの機能解析

II型肺泡上皮细胞随衰老表达的Cidea功能分析

• 批准号: 22K17825
• 负责人: 三河 隆太
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K17825/
• 关键词: 肺胞上皮細胞; 老化関連遺伝子; 呼吸器; アデノ随伴ウイルス; Ⅱ型肺胞上皮細胞; 脂肪滴; 組織恒常性維持

加齢に伴い組織に老化細胞が蓄積することで臓器の機能低下を引き起こすことが知られている。申請者は加齢に伴い呼吸器機能低下とともに発現するCidea遺伝子を2型肺胞上皮細胞中に見出した。この遺伝子は若齢マウスは褐色脂肪細胞に多く発現し、肺には殆ど発現していない。本研究ではCideaが発現していない若齢マウスの2型肺胞細胞のみに発現させるシステムを構築し、Cideaが2型肺胞上皮細胞で発現させることで呼吸機能の変化を観察する。研究室で新たに呼吸機能測定のメカニカルベンチレータを導入し、1個体のマウスから呼吸機能検査、遺伝子解析用組織、組織染色用組織を効率よく採材できる実験系を立ち上げた。老齢肺組織から抽出したRNAを用いてqPCRでCidea遺伝子発現と組織免染染色により2型肺胞上皮細胞マーカーであるSP-C抗体とCidea抗体の共局在を確認することができた。マウスの2型肺胞細胞のみに発現するシステムはタモキシフェンにより2型肺胞上皮細胞でCre酵素が発現するマウス（SftpcCreERTマウス）にCidea遺伝子配列を含むAAV FLEX(Cre-Swithc)条件的発現ベクターを気管支投与することで作製する。このベクターにはAAV感染で発現するルシフェラーゼ遺伝子配列とCre酵素により発現するCideaと蛍光色素mCherry遺伝子配列を含むベクターを作製した。これによりルシフェリン投与でAAVが呼吸器の細胞に感染したことをin vivoイメージングで確認することができる。また、タモキシフェン投与で2型肺胞上皮細胞のみにCideaとmCherryを発現し、Cideaを発現した2型肺胞上皮細胞はセルソーターで分取することができる。今後、設計したベクターを用いて2型肺胞上皮細胞におけるCidea遺伝子発現が呼吸機能に及ぼす影響を調べる予定である。

Add 齢 に with い organization に senescent cells が accumulation す る こ と で low function of viscera の を lead き up こ す こ と が know ら れ て い る. The applicant 齢に + 齢に is accompanied by a decline in the function of the <s:1> respirator とと <s:1> に is present with するCidea remains 伝 を is found in type 2 lung cell epithelial cells に た. The <s:1> cultural heritage 伝 offspring 伝 if 齢 齢 ウス ウス <e:1> brown adipocytes に are abundant く will occur <s:1>, and the lung に <e:1> is almost <e:1> will occur て な な な <e:1>. This study で は Cidea が 発 now し て い な い if 齢 マ ウ ス の type 2 cell lung cells の み に 発 now さ せ る シ ス テ ム を constructing し, Cidea が type 2 cell lung epithelial cells で 発 now さ せ る こ と で の breathing function - the を 観 examine す る. Laboratory で new た に breathing function determination の メ カ ニ カ ル ベ ン チ レ ー タ を import し, 1 individual の マ ウ ス か ら 検 breathing function check, but 伝 parsing with tissue, tissue staining with organization を sharper rate よ く mining material で き る be 験 を made ち fasten げ た. Old 齢 lung tissue か ら spare し た RNA を with い て qPCR で Cidea posthumous son 伝 発 と organization now free dye dyeing に よ り type 2 cell lung epithelial cells マ ー カ ー で あ る SP - C antibody と Cidea antibody の total bureau in を confirm す る こ と が で き た. マ ウ ス の type 2 cell lung cells の み に 発 now す る シ ス テ ム は タ モ キ シ フ ェ ン に よ り type 2 cell lung epithelial cells で Cre enzyme が 発 now す る マ ウ ス (SftpcCreERT マ ウ ス) に Cidea を 伝 child with column containing む AAV The occurrence of FLEX(cres withc) conditions: ベ タ タ を を pipe support and する する とで とで operation する. こ の ベ ク タ ー に は AAV infection で 発 now す る ル シ フ ェ ラ ー ゼ heritage 伝 with sequence と Cre enzyme に よ り 発 now す る Cidea と 蛍 photopigment mCherry heritage 伝 with sequence を containing む ベ ク タ ー を cropping し た. こ れ に よ り ル シ フ ェ リ ン cast with で AAV が respirator の cells に infection し た こ と を in vivo イ メ ー ジ ン グ で confirm す る こ と が で き る. ま た, タ モ キ シ フ ェ ン cast and で type 2 cell lung epithelial cells の み に Cidea と mCherry を 発 し, Cidea を 発 now し た type 2 cell lung epithelial cells は セ ル ソ ー タ ー resale rights exist で す る こ と が で き る. In the future, design し た ベ ク タ ー を with い て type 2 cell lung epithelial cells に お け る Cidea heritage 伝 発 now に が respiratory function and ぼ す influence を adjustable べ る designated で あ る.