老化に伴いⅡ型肺胞上皮細胞に発現するCideaの機能解析

II型肺泡上皮细胞随衰老表达的Cidea功能分析

• 批准号: 22K17825
• 负责人: 三河 隆太
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K17825/
• 关键词: 肺胞上皮細胞; 老化関連遺伝子; 呼吸器; アデノ随伴ウイルス; Ⅱ型肺胞上皮細胞; 脂肪滴; 組織恒常性維持

加齢に伴い組織に老化細胞が蓄積することで臓器の機能低下を引き起こすことが知られている。申請者は加齢に伴い呼吸器機能低下とともに発現するCidea遺伝子を2型肺胞上皮細胞中に見出した。この遺伝子は若齢マウスは褐色脂肪細胞に多く発現し、肺には殆ど発現していない。本研究ではCideaが発現していない若齢マウスの2型肺胞細胞のみに発現させるシステムを構築し、Cideaが2型肺胞上皮細胞で発現させることで呼吸機能の変化を観察する。研究室で新たに呼吸機能測定のメカニカルベンチレータを導入し、1個体のマウスから呼吸機能検査、遺伝子解析用組織、組織染色用組織を効率よく採材できる実験系を立ち上げた。老齢肺組織から抽出したRNAを用いてqPCRでCidea遺伝子発現と組織免染染色により2型肺胞上皮細胞マーカーであるSP-C抗体とCidea抗体の共局在を確認することができた。マウスの2型肺胞細胞のみに発現するシステムはタモキシフェンにより2型肺胞上皮細胞でCre酵素が発現するマウス（SftpcCreERTマウス）にCidea遺伝子配列を含むAAV FLEX(Cre-Swithc)条件的発現ベクターを気管支投与することで作製する。このベクターにはAAV感染で発現するルシフェラーゼ遺伝子配列とCre酵素により発現するCideaと蛍光色素mCherry遺伝子配列を含むベクターを作製した。これによりルシフェリン投与でAAVが呼吸器の細胞に感染したことをin vivoイメージングで確認することができる。また、タモキシフェン投与で2型肺胞上皮細胞のみにCideaとmCherryを発現し、Cideaを発現した2型肺胞上皮細胞はセルソーターで分取することができる。今後、設計したベクターを用いて2型肺胞上皮細胞におけるCidea遺伝子発現が呼吸機能に及ぼす影響を調べる予定である。

The accumulation of aging cells in the tissue and the insufficiency of the function of the organ are caused by the accumulation of aging cells. The applicant is suffering from respiratory insufficiency and the symptoms of respiratory failure are present in type 2 pneumocyte epithelial cells.この伝子は如齢マウスはBrown fat cells are more and more, and the lungs are more and more. This study is based on the results of this study.ムをConstructionし、Cideaが2 type pneumocyte epithelial cells で発 appear させることでRespiratory function の変化を観Observationする. The laboratory's new respiratory function measurement system is introduced into the laboratory, and the respiratory function of one individual is measured. Tissues for functional examination, tissue analysis, and tissue staining are used for tissue analysis and efficiency. The old lung tissue was extracted and RNA was extracted, and the RNA was extracted and stained using Cidea qPCR and the tissue was dye-free and stained 2 The colocalization of SP-C antibody and Cidea antibody in type pneumocyte epithelial cells has been confirmed. Type 2 pneumocyte epithelial cell type 2 Cr e enzyme が発成するマウス（SftpcCreERTマウス）にCidea 伝子配array をcontains むAAV FLEX (Cre-Swithc) conditions are the same as those produced by the company.このベクターにはAAV infection で発appears するルシフェラーゼ缝子综合とCre enzyme によりIt is produced by Cidea, a photochromic pigment mCherry, and a combination of it. Injection of AAV into respirator cells and infected cells vivoイメージングでconfirmationすることができる.また、タモキシフェンで2 pneumocyte epithelial cells のみにCideaとmCherryを発The type 2 pneumocyte epithelial cells are divided into two types. From now on, it is planned to use the type 2 pneumocyte epithelial cells of the Cidea to control the respiratory function and influence the respiratory function of the design.