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老化関連遺伝子SIRT1による神経細胞死抑制メカニズムの解析

衰老相关基因SIRT1抑制神经细胞死亡的机制分析

基本信息

批准号：
09J05137
负责人：
藤田幸
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J05137/
关键词：
SIRT1 zyxin 脱アセチル化 Yeast Two-Hybrid法アポトーシス NAD/NADH 核内移行シグナル免疫沈降法 NAD NADH

项目摘要

これまでに、SIRT1とzyxinがほ乳類細胞内で結合することを免疫沈降法により示したが、この実験系では、SIRT1,zyxin両者の結合が、直接結合であるか、細胞内因子などを介した間接的な結合によるのかについては定かではないnそこで、SIRT1とzyinが直接結合するか、in vitro pull-down assayにより検討した.大腸菌にGST-SIRT1またはHis-zyxin発現ベクターを導入し、Glutathione sepharoseまたはNi agaroseを用いてSIRT1、zyxinのタンパク質を精製することに成功した。また、zyxin deletion mutantとの結合を調べることにより、これまでに行った酵母での実験結果と同様に、zyxinのLIM domain3が、SIRT1との結合に必要であることを確認した。さらに、申請者は、中枢神経系におけるSIRT1の機能を詳細に調べるため、脳組織におけるSIRT1の発現分布について検討した。Real-TimePCR法、Western blot法により、RNAレベル、タンパク質レベルでの両者の発現を解析した結果、SIRT1,zyxinともにマウスの各臓器で発現していることを確認した。マウスの発生段階ごとの両者の発現レベルを比較した結果、各発現段階で両者ともに発現していた。また、in vivoでのSIRT1の機能を調べるため、SIRT1の発現をRNAiで抑制し、アポトーシス細胞の増減をTUNEL染色で検討したCoSIRT1の発現抑制のため、pSuper-GFPvectorにSIRT1のsiRNA配列を導入し、SIRT1shRNAベクターを作成した。in ovo electropolation法によりニワトリ胚網膜細胞に導入し、SIRT1の発現を抑制することを試みた。

The immuno-sedimentation method of immunoprecipitation assay (immuno-sedimentation assay) was used to determine the molecular weight of human milk. The results of immuno-sedimentation assay showed that the combination of SIRT1,zyxin and SIRT1,zyxin, the direct combination of DNA, the introduction of intracellular factors and the combination of DNA, SIRT1 and SIRT1 were used to determine the molecular weight of human milk, SIRT1 and in vitro pull-down assay, respectively. GST-SIRT1

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

RGMa modulates T cell responses and is involved in autoimmune encephalom

RGMa 调节 T 细胞反应并参与自身免疫性脑病

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
Nature Medicine
影响因子：
82.9
作者：
Muramatsu;R.;Kubo;T.;Mori;M.;Nakamura;Y.;Fujita;Y.;Akutsu;T.;Okuno;T.;Taniguchi;J.;Kumanogoh;A.;Yoshida;M.;Mochizuki;H.;Kuwabara;S.;Yamashita;T.
通讯作者：
T.

Axotomy induces axonogenesis in hippocampal neurons through STAT3.