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老化関連遺伝子SIRT1による神経細胞死抑制メカニズムの解析

衰老相关基因SIRT1抑制神经细胞死亡的机制分析

基本信息

批准号：
09J05137
负责人：
藤田幸
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J05137/
关键词：
SIRT1 zyxin 脱アセチル化 Yeast Two-Hybrid法アポトーシス NAD/NADH 核内移行シグナル免疫沈降法 NAD NADH

项目摘要

これまでに、SIRT1とzyxinがほ乳類細胞内で結合することを免疫沈降法により示したが、この実験系では、SIRT1,zyxin両者の結合が、直接結合であるか、細胞内因子などを介した間接的な結合によるのかについては定かではないnそこで、SIRT1とzyinが直接結合するか、in vitro pull-down assayにより検討した.大腸菌にGST-SIRT1またはHis-zyxin発現ベクターを導入し、Glutathione sepharoseまたはNi agaroseを用いてSIRT1、zyxinのタンパク質を精製することに成功した。また、zyxin deletion mutantとの結合を調べることにより、これまでに行った酵母での実験結果と同様に、zyxinのLIM domain3が、SIRT1との結合に必要であることを確認した。さらに、申請者は、中枢神経系におけるSIRT1の機能を詳細に調べるため、脳組織におけるSIRT1の発現分布について検討した。Real-TimePCR法、Western blot法により、RNAレベル、タンパク質レベルでの両者の発現を解析した結果、SIRT1,zyxinともにマウスの各臓器で発現していることを確認した。マウスの発生段階ごとの両者の発現レベルを比較した結果、各発現段階で両者ともに発現していた。また、in vivoでのSIRT1の機能を調べるため、SIRT1の発現をRNAiで抑制し、アポトーシス細胞の増減をTUNEL染色で検討したCoSIRT1の発現抑制のため、pSuper-GFPvectorにSIRT1のsiRNA配列を導入し、SIRT1shRNAベクターを作成した。in ovo electropolation法によりニワトリ胚網膜細胞に導入し、SIRT1の発現を抑制することを試みた。

SIRT1 and zyxin bind to breast cells directly, in vitro pull-down assay, in vitro pull-down assay. Escherichia coli GST-SIRT1 and His-zyxin were successfully introduced into the system, and Glutathione sepharose and Ni agar were successfully purified. Zyxin deletion mutant is bound to the same domain as Zyxin deletion mutant and SIRT deletion mutant is bound to the same domain. In addition, the applicant should carefully adjust the function of SIRT1 in the central nervous system, and organize the distribution of SIRT1. Real-Time PCR, Western blot, and SIRT1,zyxin, and their detection The results of the comparison between the development stages and the development stages are as follows: SIRT1 function in vivo was modulated, SIRT1 expression was suppressed, loss of SIRT1 cells was reduced, TUNEL staining was used to investigate RNAi inhibition of SIRT1 expression, pSuper-GFPvector siRNA1 alignment was introduced, SIRT1 shRNA was created. In vitro electroporation method was used to inhibit the expression of SIRT1 in embryonic omental cells.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

RGMa modulates T cell responses and is involved in autoimmune encephalom

RGMa 调节 T 细胞反应并参与自身免疫性脑病

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
Nature Medicine
影响因子：
82.9
作者：
Muramatsu;R.;Kubo;T.;Mori;M.;Nakamura;Y.;Fujita;Y.;Akutsu;T.;Okuno;T.;Taniguchi;J.;Kumanogoh;A.;Yoshida;M.;Mochizuki;H.;Kuwabara;S.;Yamashita;T.
通讯作者：
T.

Axotomy induces axonogenesis in hippocampal neurons through STAT3.