甲状腺ホルモン受容体の基礎転写活性抑制機構の解明

阐明甲状腺激素受体的基本转录活性抑制机制

• 批准号: 09770782
• 负责人: 西山 孝三
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770782/
• 关键词: 甲状腺ホルモン受容体(TR); サイレンシング作用; レチノイドX受容体(RXR); コンプレッサー蛋白; 甲状腺ホルモン不応症; T3受容体(TR); レチノイドエックス受容体(RXR); コンプレッサー; T3応答領域(TRE)

甲状腺ホルモン受容体(TR)は、T3非存在下では標的遺伝子の基礎転写活性を抑制するサイレンシング作用を示す。TRのサイレンシング作用の発揮には、コレプレッサー蛋白など複数の核内蛋白が関与する。機能的TRであるTRβ1とTRα1のC端約40個のアミノ酸は完全に一致しており、C末端には最小17個のアミノ酸よりなる転写活性化能を有するAF2ドメインが存在する。今回の研究では、甲状腺ホルモン不応症で発見されたC端11個のアミノ酸を欠失した異常TRβ1(βF451X)とC端13個のアミノ酸を欠失したβE449X、さらにβF451XやβE449Xと相同なC端欠失を有するよう作成した異常TRα1(αF397XとαE395X)を用いて、サイレンシング作用におけるTRβ1とα1のAF2ドメインの役割をレチノイドX受容体(RXR)やコレプレッサー蛋白(SMRT、N-CoR)との相互作用の点から解析した。 1.種々のC端欠失異常TRβ1とα1のサイレンシング作用の比較:βF451Xは、direct repeatやpalindromic repeatといったT3応答領域(TRE)において正常TRβ1よりも強いサイレンシング作用を示したが、βE449Xのそれは正常TRβ1と同程度であった。一方、αF397XとαE395Xは、共に正常TRα1よりも強いサイレンシング作用を示した。2.RXRに対する結合親和性の比較:Gal4-RXRとVP16-TRβ1の結合を競合阻害するtwo-hybrid assay系において、βF451Xは正常TRβ1に比し有意に強いRXRとの結合能を示したが、βE449Xのそれは正常TRβ1よりも弱かった。一方、正常TRα1、αF397X、αE395Xの間にRXRとの結合親和性に関して有意な差を認めなかった。3.SMRTに対する結合親和性の比較:Gal4-SMRTとVP16-TRβ1を用いた系において、βF451Xは正常TRβ1やβE449Xよりも有意に強い結合親和性を示したが、正常TRα1、αF397X、aE395Xの間に有意な差を認めなかった。4.N-CoRに対する結合親和性の比較:Gal4-N-CoRとVP16-TRβ1を用いた系において、βE449Xは正常TRβ1やβF451Xに比し、また、αE395Xは正常TRα1やαF397Xに比して有意に弱い結合親和性を示した。以上より、TRβ1のAF2ドメインのC末端11個と13個の欠失ではRXRやコレプレッサー蛋白との結合に対する影響が異なること、TRβ1とα1でAF2ドメインの破壊によるサイレンシング作用への影響が異なることが示唆された。正常およびC端欠失異常TRβ1のサイレンシング作用の強さは、コレプレッサーSMRTとの結合能に相関したが、正常およびC端欠失異常TRα1のサイレンシング作用は、RXRやコレプレッサーSMRT、N-CoRとの結合性に相関せず他の要因が関与することが推測された。

Thyroid receptor (TR) inhibits the basal transcription activity of target genes in the absence of T3. The development of TR gene expression is related to the expression of multiple nuclear proteins. About 40 amino acids at the C-terminal of TRβ1 and TRα1 are completely consistent with each other, and at least 17 amino acids at the C-terminal of TR α 1 and TR α 1 are completely consistent with each other. In this study, thyroid cancer was found in 11 patients with C-terminal acid deficiency, abnormal TRβ 1 (β F451X), 13 patients with C-terminal acid deficiency, abnormal TR α 1(β E449X), abnormal TRβ1(β F451X), abnormal TR β1(β E449X), abnormal TR α 1 (β F451X), abnormal TR α 1 (β E449X), abnormal TRα1 (β F449X),(α F397X α E395X) The analysis of the interaction points between TRβ1 and α1 AF2 receptor (RXR), SMRT and N-CoR. 1. A comparison of the effects of βF451X on TRβ1 and α1 in the absence of normal TRβ1 and β E449 X on TR β 1 in the absence of normal TR β 1 and β E451 X on TRβ1 in the absence of normal TRβ 1 and β E451 X on TRβ1 in the absence of normal TRβ1 and βE449X on TRβ1 in the absence of normal TRβ1. One side, αF397X and αE395X, the total normal TRα1, the strong support, the role of the 2. Comparison of binding affinities of RXR: The binding affinity of Gal4-RXR and VP16-TRβ1 is higher than that of normal TRβ1 in the two-hybrid assay system, and β F451X is higher than that of normal TRβ1 in the two-hybrid assay system. The binding affinity of RXR between α1, α F397X and α E395X is intentionally different. 3. Comparison of binding affinities for SMRT: Gal4-SMRT and VP16-TRβ1 were used in the middle of the system, β F451X was used in the normal TRβ1 and β E449X was used in the middle of the system, β F451X was used in the normal TR β 1 and β E449X was used in the middle of the system. 4. Comparison of binding affinities for N-CoR: Gal4-N-CoR and VP16-TRβ1 are used in the middle, β E449X is used in the middle, α E395X is used in the middle, β E449X is used in the middle, β E449X is used in the middle, α E449X is used in the middle, α E449X is used in the middle, β E449X is used in the middle, α E449X is used in the middle, β E449X is used in the middle, α E395X is used in the middle, α E395X is used in the middle, β E44499X is used in the middle, α E44495X is used in the middle, α E395X is used in the middle, α E395X is The above results show that the 11 and 13 deletions of TRβ1 and AF2 terminal proteins have different effects on the binding of RXR and AF 2 terminal proteins, and that TRβ1 and AF2 terminal proteins have different effects on the binding of RXR and AF 2 terminal proteins. The correlation between the binding energy of normal and C-terminal deficient TRβ1 and the binding energy of normal and C-terminal deficient TRα1 was analyzed. The correlation between the binding energy of normal and C-terminal deficient TR β 1 and the binding energy of RXR and C-terminal deficient TRα1 was analyzed.

项目成果

Kozo Nishiyama: "Difference in Dominant Negative Activities between Mutant Thyroid Hormone Receptors α1 and β1 with an Identical Truncation in the Extreme Carboxyl-Terminal Tau4 Domain" Molecular and Cellular Endocrinology. (1998)

Kozo Nishiyama：“在极端羧基末端 Tau4 结构域中具有相同截短的突变型甲状腺激素受体 α1 和 β1 之间的显性负活性差异”分子和细胞内分泌学 (1998)。

西山孝三、中村浩淑: "甲状腺ホルモンレセプターの機能と異常" 診断と治療(診断と治療社). 85(7). 1106-1112 (1997)

Kozo Nishiyama、Hiroyoshi Nakamura：“甲状腺激素受体的功能和异常”诊断和治疗（诊断和治疗出版）85（7）（1997）。

西山孝三、中村浩淑: "甲状腺ホルモンの作用機序の新しい展開" 内分泌・糖尿病科(科学評論社). 7(1). 17-24 (1998)

Kozo Nishiyama，Hiroyoshi Nakamura：“甲状腺激素作用机制的新进展”内分泌和糖尿病系（Kagaku Hyoronsha）7（1）（1998）。

西山孝三、中村浩淑: "甲状腺ホルモン受容体異常症" 別冊・医学のあゆみ/内分泌・代謝疾患(医歯薬出版株式会社). 361-363 (1997)

Kozo Nishiyama、Hiroyoshi Nakamura：“甲状腺激素受体异常”分册：医学/内分泌和代谢疾病史（石药出版有限公司）361-363（1997）。