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温度応答性界面への細胞接着力の定量評価と細胞分離システムへの応用

细胞对温度响应界面粘附力的定量评估及其在细胞分离系统中的应用

基本信息

批准号：
09780813
负责人：
菊池明彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

温度変化に応答し低温で親水性、高温で疎水性を示すポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(PIPAAm)誘導体を固体表面に導入し、この表面を用いた新規な疎水性細胞クロマトグラフィーの確立を目指した。今年度は、生理条件下で負荷電を有する細胞と静電相互作用するアミノ基をIPAAmとともに導入した表面を作製し、この表面とリンパ球との相互作用を作用場流動分画法により解析した。IPAAmとN,N-ジメチルアミノプロピルアクリルアミド(DMAPAA)をその混合比を変化させて50w/w%イソプロピルアルコール溶液とし、この所定量を組織培養用ボリスチレン表面に塗布後、直ちに電子線(150kV.0.3MGy)を照射することでポリマーの重合と表面への固定を同時(こ行った。表面へのポリマーの導入はESCAとFT-IR/ATRにより確認し、その導入量は約1.5μg/cm^2であった。表面電位測定から、PIPAAmの導入により表面の負荷電が中和され、さらにDMAPAAを導入することで正に転じた。さらに、低温で親水性、高温側で疎水性となることを接触角測定から明らかとした。この表面とラット腸間膜リンパ節リンパ球との相互作用を作用場流動分画法を用いて解析した。いずれの表面でも剪断応力の増大につれてリンパ球の回収率は増加し、かつ、37℃よりも4℃で高い回収率を示した。これは、低温側でより親水性の表面とリンパ球とが弱い相互作用をすることを示している。興味深いことに、DMAPAAを5mol%仕込んだ表面では37℃でも著しく弱い相互作用を示し、60-80%のリンパ球が回収された。さらなるDMAPAAの導入でリンパ球と表面との静電相互作用が強く発現し、4℃でも回収率が減少した。少量のアミノ基を導入した表面は、正荷電を有するにも関わらず水和構造が著しく変化するために37℃でもリンパ球ときわめて弱い相互作用をしたと考えられた。以上から、温度変化とアミノ基の導入量を変化させることでリンパ球との相互作用を任意に制御できることが示された。

Temperature changes: Low temperature, hydrophilic, high temperature, aqueous, induction, introduction, surface, and establishment of aqueous cells. Under physiological conditions, the interaction between cells and electrostatic forces is analyzed by flow analysis. The mixing ratio of IPAAm and N,N-(DMAPAA) was changed to 50w/w% IPAAm solution. After this amount was coated on the surface of the tissue culture, direct electron beam (150kV. 0.3MGy) was irradiated to achieve simultaneous superposition and surface fixation. The introduction of surface impurities is confirmed by ESCA FT-IR/ATR. The amount of impurities introduced is about 1.5μg/cm^2. Surface potential measurement, PIPAAm introduction, surface load neutralization, DMAPAA introduction, and surface load neutralization Contact angle measurement: Hydrophilic at low temperature, hydrophilic at high temperature. The interaction between the two spheres is analyzed by the method of flow analysis. As the shearing force on the surface of the glass increases, the recovery rate of the glass particles increases, and the recovery rate is as high as 37 ° C to 4 ° C. The surface of the hydrophilic layer on the cold side of the film is free from the weak interaction between the particles. DMAPAA is 5mol % of the total surface area and 60-80% of the total surface area is 37℃. The introduction of DMAPAA resulted in a strong electrostatic interaction between the spherical surface and the surface, and a decrease in the recovery rate at 4℃. A small amount of water is added to the surface. The above changes in temperature and the amount of introduction of the base change in temperature and the interaction of the base change in temperature.