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動物細胞の低タンパク無血清培養と分離型バイオリアクターによる有用物質生産の効率化

利用低蛋白、无血清的动物细胞培养物和单独的生物反应器提高有用物质的生产效率

基本信息

批准号：
10750559
负责人：
山地秀樹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子組換えの宿主として現在広く利用されているChinese hamster ovary(CHO)細胞を対象にしたこれまでの検討から,ホスファチジン酸(PA)やリゾホスファチジン酸(LPA)などのリン脂質が無血清培養下におけるCHO細胞の増殖を促進することが示された.しかしながら,長鎖のアシル基を有するリン脂質は難溶性であり,培地に添加すると沈殿や凝集物の形成が認められることから,細胞にあまり有効に利用されていない可能性が示唆された.そこで本年度は,PAやLPAなどのリン脂質の細胞への効率的な供給方法の開発とこれらのリン脂質が組換えタンパク質生産に及ぼす影響について検討した.まず,リン脂質の新たな供給方法として,リン脂質をTween 80やPluronic F-68とともにマイクロエマルションを形成させる方法を検討した.その結果,リン脂質の溶解度が増大し,培地中での沈殿の形成も抑制できることがわかった.本法により調製したPAも無血清培養下におけるCHO細胞の増殖を促し,PA単独で添加した場合に比べて大きな細胞増殖促進効果が得られたことから,細胞がリン脂質をより有効に利用できるようになったものと考えられる.次に,マイクロエマルション法により調製したPAやLPAを無血清培地に添加し,組換えCHO細胞の培養特性を調べた.これらのリン脂質は,組換え細胞の増殖を促進するだけではなく,細胞1個あたりの組換えタンパク質の生産量を増大させたことから,タンパク質生産を活性化する作用も有することがわかった.したがって,PAやLPAは,無血清培養において細胞増殖のみならず組換えタンパク質生産も促進する因子として活用できる可能性が示唆された.

The host cells of the sub-group are now used to stimulate the proliferation of Chinese hamster ovary(CHO) cells in serum-free culture. The long chain of lipids is insoluble in the medium, and the addition of lipids to the medium and the formation of aggregates are recognized as possible in the cell. This year, the development of methods for the supply of PA and LPA to lipid and cellular efficiency, the development of lipid and cellular efficiency, and the impact of lipid and cellular efficiency on lipid composition and production were investigated. A new method for the supply of lipids is discussed. The method for the formation of lipids from Tween 80 and Pluronic F-68 is discussed. As a result, the solubility of lipids increases, and the formation of sinks in culture is inhibited. This method was used to modulate the proliferation of CHO cells in serum-free culture. In the case of PA addition alone, the proliferation of CHO cells was promoted. In addition, the culture characteristics of CHO cells were modulated by PA and LPA in serum-free culture The effect of lipid, protein and protein production on cell proliferation was investigated. In addition,PA and LPA have demonstrated the possibility of cell proliferation in serum-free culture and the use of factors that promote cell production.