权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

昆虫細胞培養による情報伝達関連タンパク質生産の特性解析と効率化

昆虫细胞培养信息传输相关蛋白质生产的表征和效率改进

基本信息

批准号：
12750703
负责人：
山地秀樹
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

昆虫細胞-バキュロウイルス系は,生物学的活性や高次構造が本来のものと同様の組換えタンパク質を大量に発現可能な系として近年注目を集めている.昆虫細胞の培養では,動物細胞の場合と同様に,通常,牛胎児血清(FBS)を10%程度添加した培地が用いられる.しかしながら,血清の使用により,目的タンパク質の分離精製が困難となるなどの問題が生じるため,工業的規模での有用タンパク質の生産には無血清培地の使用が望まれる.昆虫細胞培養による機能性タンパク質の高効率生産プロセスを構築するための基礎を確立することを目的として,本年度は,血清を添加していない基礎培地における組換えタンパク質生産について検討した.まず,基礎培地としてTNM-FHを用いてFBSの有無が昆虫細胞Sf9の増殖に及ぼす影響を調べた.FBSを10%添加したTNM-FHと比べて,FBSを添加していない場合,昆虫細胞Sf9の増殖速度は小さく,到達細胞密度も低かった.また,動物細胞の増殖促進効果を有するホスファチジン酸(PA)を添加しても,細胞増殖には変化が見られなかった.ところが,β-galactosidaseを発現する組換え核多角体病ウイルスをSf9に感染させ組換えタンパク質生産に及ぼす影響を検討したところ,FBSを添加していないTNM-FHの場合でも,FBSを10%添加した場合と比較して約2/3のβ-galactosidaseが生産されることがわかった。また,PAを10mg/lの濃度で添加する,あるいは組換えウイルスの感染多重度(MOI)を高くすることにより,いずれもβ-galactosidaseの生産がさらに促進された.このように,血清を添加していない基礎培地を用いた場合でも,大量の組換えタンパク質を生産できたことから,経済性などの点で優れたプロセスを構築できる可能性が示唆された.

Insect cells are biologically active and highly structured, and a large number of species have been discovered. In insect cell culture, bovine fetal serum (FBS) is usually added to 10% of animal cells. The use of serums is difficult to isolate and purify, and problems arise in the production of useful serums on an industrial scale. Insect cell culture is a functional medium for high efficiency production. The purpose of this study is to establish the basis for the establishment of a high efficiency production medium for insect cell culture. Also, the presence or absence of FBS can regulate the growth and growth of insect cells Sf9 when basic culture is used. When TNM-FH is added with 10% FBS, compared with TNM-FH, when FBS is added, the growth rate of insect cells Sf9 is very low, and the cell density reached is very low. The growth promotion effect of animal cells has been improved by the addition of PA, and the growth promotion effect of animal cells has been improved. In the case of TNM-FH, FBS was added by 10%, and the production of β-galactosidase was compared by about 2/3. PA at a concentration of 10mg/l was added to promote the production of β-galactosidase. In this case, a large number of components are added to the basic training ground, and the possibility of constructing the basic training ground is indicated.