均一化cDNAライブラリーを用いた病原菌の形態分化に関与する遺伝子群の分離、解析
使用均质 cDNA 文库分离和分析参与病原菌形态分化的基因组
基本信息
- 批准号:10760031
- 负责人:
- 金额:$ 1.28万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1998
- 资助国家:日本
- 起止时间:1998 至 1999
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
近年、植物病原菌の感染器官である付着器の形成機構について遺伝子レベルでの解析が行われている。これまでディファレンシャルスクリーニングによって、付着器形成時に特異的な発現を示す数種の遺伝子の分離が報告されているが、その分離効率は高くなく、また得られた遺伝子はほとんど高発現遺伝子である。従来のディファレンシャルスクリーニングにおけるこれらの問題がクローン間の存在比を一定にした均一化cDNAライブラリーを用いることで解決されると考え、本研究において、均一化cDNAライブラリーの構築を行い、このライブラリーに対するスクリーニングを行った結果、付着器形成時に特異的な発現を示す11種の遺伝子の分離に成功した。1.ウリ類炭そ病菌における均一化cDNAライブラリーの構築本菌における均一化cDNAライブラリーの構築を試みた。構築されたライブラリーについて均一化の評価を行った結果、通常のcDNAライブラリーにおいては遺伝子間の割合に約300倍の差が見られたのに対し、均一化処理を行ったライブラリーにおいては、その差は約10倍まで下がり、均一化が成功していることが判明した。これは糸状菌における均一化cDNAライブラリー構築の最初の報告例である。2.付着器形成時に優先的な発現を示す遺伝子の分離均一化cDNAライブラリー中のクローンについて、ディファレンシャルハイブリダイゼーションにより、菌糸生育時に発現が見られず付着器分化時に発現が見られる遺伝子群の選抜を試みた。その結果、付着器分化時に優先的に発現する11種の遺伝子(CAD1からCAD11と命名)の分離に成功した。CAD遺伝子の発現量は高発現から低発現まで多様であった。3.分離されCAD遺伝子の解析CAD遺伝子の幾つかについて構造決定を行った結果、メタロチオネインまたはAspergillus属のマイコトキシン合成クラスター遺伝子などとの相同性が見い出された。
In recent years, plant pathogens infected organs have been identified and analyzed in the form of attachment mechanisms. The separation rate of several species of DNA is high when the donor is formed. In this study, the construction of a uniform cDNA library was carried out, and the results of the study showed that the isolation of 11 kinds of cDNA fragments was successful. 1. Homogenized cDNA library construction of the strain As a result of the evaluation of the homogenization of the constructed cDNA, a difference of about 300 times in the separation between the usual cDNA cDNA The first reported example of the construction of a homogeneous cDNA library for this species is 2. During the formation of the receptor, the preferential expression of the gene was detected, and the separation and homogenization of the gene was carried out. During the development of the bacteria, the preferential expression of the gene was detected, and the selection of the gene was tried. As a result, the separation of 11 genes (CAD1, CAD11 and CAD11) was successful. The amount of CAD emission varies from high to low. 3. Separation and analysis of CAD gene and determination of structure of CAD gene. Results of determination and synthesis of Aspergillus gene and identification of CAD gene.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
稲垣温子: "Construction of an equalized cDNA library from Colletotrichum lagenarium and its application to the isolation of differentially expressed genes"Can.J.Microbiol.. 46. 150-158 (2000)
Atsuko Inagaki:“Colletotrichum lagenarium 的均衡 cDNA 文库的构建及其在差异表达基因分离中的应用”Can.J.Microbiol.. 46. 150-158 (2000)
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
高野義孝: "The Colletotrichum lagenarium MAP kinase gene CMK1 regulates diverse aspects of fungal pathogenesis"Mol.Plant-Microbe Interact.. 13(印刷中). (2000)
Yoshitaka Takano:“Colletotrichum lagenarium MAP 激酶基因 CMK1 调节真菌发病机制的各个方面”Mol.Plant-Microbe Interact.. 13(印刷中)。
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