权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

蛋白性メタルプロテアーゼインヒビター,SMPIの構造・機能解析と応用

蛋白金属蛋白酶抑制剂SMPI的结构功能分析及应用

基本信息

批准号：
10760051
负责人：
平賀和三
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Kyoto Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760051/
关键词：
Inhibitor metallo proteinase Streptomyces killer toxin mutant inhibitor metalloproteinase proteinaceous structure

项目摘要

SMPIはStreptomycesが生産する、蛋白性メタルプロテアーゼインヒビターである。SMPIの構造解析結果に基づき、SMPIの阻害ループ内の塩基性アミノ酸、ジスルフィド結合、及び、Pro残基が阻害活性発現に及ぼす役割を精査した。SMPlの構造解析から、SMPIとサーモリシンの静電的相互作用が重要であることが示唆された(J.Mol.Biol.,282,435-446,1998)。そこで、P5位のR60,P4位のK61,P2'位のR66に関して、各種変異体を作成した(R60A,K61A,R66A,R60/K61A,60/61/66A,60/61/66E)。その結果、R66A,60/61/66A,60/61/66E変異体の阻害活性が極めて弱くなり、サーモリシンにより分解された。更にサーモリシンとSMPI複合体の形成をコンピュータシミユレーションした結果は、このことを指示していた。従って、阻害反応部位近傍の塩基性アミノ酸は安定な酵素-阻害剤複合体の維持に必要であると結論した。特にR66の変異が阻害活性を左右していたことから、S1'位の疎水ポケットとの疎水的相互作用に必須であると考えられる。Standard mechanismに従い、阻害反応部位近傍のジスルフィド結合とP68の変異体を作製したところ、いずれも阻害活性が極めて弱くなり、サーモリシンによって急速に分解された。これらの結果から、SMPIが阻害剤として機能するためには、ジスルフィド結合とP68も重要であることが明らかとなった(J.Biochem.,125,202-209,1999)。また、キラートキシン様蛋白がメタルプロテアーゼインヒビター活性を有するか、或いはその逆の事項に関しても精査したが、それらの活性は認められなかった(Biosci.Biotechnol.Biochem.,63,1037-1044,1999)。

SMPI's Streptomyces production line, protein-based streptomyces, protein-based streptomyces. The results of structural analysis of SMPI include the following: SMPI inhibits the binding of basic amino acids, the binding of amino acids, and Pro residues of SMPI, and inhibits the active expression and detection of active substances. Structural analysis of SMPl and the importance of electrostatic interaction in SMPI are important (J. Mol. Biol., 282, 435-446, 1998).そこで, P5-position のR60, P4-position のK61, P2'-position のR66 に关して, various variants of した (R60A, K61A, R66A, R60/K61A, 60/61/66A, 60/61/66E). As a result, R66A, 60/61/66A, 60/61/66E allogeneic blockage activity is extremely weak, and the decomposition of R66A, 60/61/66A, and 60/61/66E is weak. More details on the formation of SMPI complexシミユレーションしたRESULTは, このことをINDICATION していた. Therefore, it is necessary to maintain the enzyme-blocking agent complex near the base of the inhibitory reaction site, such as basic amino acids and stable enzymes. The special features of R66 are that it inhibits the interaction between the active and active parts and the S1' position of the water. Standard The mechanism is a combination of P68 and P68, which is close to the reaction area.したところ, いずれも hinder active が极めてweak くなり, サーモリシンによって rapid にdegradation された.これらのRESULT から、SMPI が hinder としてFUNCTION するためには、ジスルフィドcombinationとP68も重It is necessary to make a clear picture (J. Biochem., 125, 202-209, 1999).また、キラートキシン様protein がメタルプロテアーゼインヒビターActive を有するか、or いはその reverse のmatter に关しても精探したが、それらのActivityはcognitionめられなかった (Biosci. Biotechnol. Biochem., 63, 1037-1044, 1999).