鶏脂肪細胞リポプロティンリパーゼ遺伝子のクローニングとその発現制御領域の解明

鸡脂肪细胞脂蛋白脂肪酶基因的克隆及其表达控制区的阐明

• 批准号: 10760158
• 负责人: 佐藤 幹
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760158/
• 关键词: リポプロテインリパーゼ; 鶏; 脂肪蓄積; cDNAクローニング

脂肪過剰蓄積のメカニズムの解明とその制御法の開発を目標として、脂肪組織での主要な脂肪蓄積調節酵素であるリポプロテインリバーゼ(LPLase)の遺伝子・蛋白質発現機構を明らかにすることを目的とした。本年度は、鶏脂肪細胞培養系の作成と脂肪組織LPLase cDNAのクローニングを行なった。(1) 鶏脂肪細胞培養系の作成無菌的に採取した7日齢ブロイラー雛の脂肪組織を供試し、酵素消化法により脂肪前駆細胞を調製した。鶏脂肪前駆細胞は10%FBSを含むM199(Growth medium)で増殖し、Growth mediumに10mM Glucose、200μg/ml Insulin、250nM Dexamethason、33μM biotin、17μM pantothenaeおよび1mM oleic acidを添加すると24時間後に脂肪滴を有する脂肪細胞に分化した。分化した脂肪細胞は、細胞内にトリグリセリドを蓄積し、LPLase活性およびVLDL receptor、LeptinのmRNAを発現しており、鶏の脂肪蓄積機構を分子生物学的に解析するのに適した細胞であることが確認された。(2) 脂肪細胞LPLaseのcDNAクローニングまず、LPLase発現の活発な鶏脂肪細胞のcDNAライブラリー(ベクター:pBluescript II KS+)を作成した。次に、ブロイラー精製LPLaseのアミノ酸配列よりプローブを作成し、cDNAライブラリーを用いたコロニーハイブリダイゼーションで完全長のcDNAをクローニングすることに成功した。ブロイラーLPL cDNAは2,297bpで、490個のアミノ酸をコードしていた。また、鶏LPLのタンパク質部分の推定分子量は52,601、等電点は7.91と推定され、糖鎖付加を経て活性を持つ成熟LPLとなることが推測された。

The development of lipid accumulation and its regulation is aimed at the development of lipid accumulation regulation enzymes (LPLase) and protein production mechanisms. This year, the preparation of subcutaneous fat LPLase cDNA from adipocyte culture lines was carried out. (1)Adipose cell culture system was prepared aseptically and prepared by enzyme digestion method. Adipose cells were cultured in 10% FBS with M199(Growth medium), and differentiated in Growth medium with 10mM Glucose, 200μg/ml Insulin, 250nM Dexamethason, 33μM Biotin, 17μM Pantothenae, and 1mM Oleic Acid 24 hours later. Differentiation of adipocytes, intracellular accumulation, LPLase activity, VLDL receptor, Leptin mRNA expression, and molecular biology analysis of adipocytes (2)Adipose cell LPLase cDNA library, LPLase production and activation of adipocyte cDNA library (library:pBluescript II KS+) Next, the LPLase was refined and the cDNA sequence was successfully completed. LPL cDNA contains 2,297 bp and 490 amino acids. The estimated molecular weight of LPL was 52,601, and the isoelectric point was 7.91. The estimated molecular weight of LPL was 52,601, and the isoelectric point was 7.91. The estimated molecular weight of LPL was 52,601, and the isoelectric point was 7.91. The estimated molecular weight of LPL was 52,601, and the isoelectric point was 7.91. The estimated molecular weight of LPL was 52,601.