アポプロテインC-IIとC-IIIによる鶏脂肪組織リポプロテインリパーゼ反応の制御機構

脱辅基蛋白C-II和C-III对鸡脂肪组织脂蛋白脂肪酶反应的控制机制

• 批准号: 07760258
• 负责人: 佐藤 幹
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760258/
• 关键词: 鶏; リポプロテインリパーゼ; Apo C-II; Apo C-III; Apo A-I

(1)鶏、ラットおよびヒトの血漿から超遠心で分離したカイロミクロンおびVLDLからMorrisettらの方法によりApoproteinを調製した。分離したApoproteinを6M尿素で可溶化後、分子量1万の限外濾過により得たApo C群をMno Q^Rに供し、0.4MまでのNaCl直鎖グラディントで溶出した。各種動物から調製したいずれの試料も、0.1〜0.2M付近にリポプロテインリパーゼ(LPLase)活性化作用を示すApo C-IIのピークが溶出した。さらに、ヒトでは、Apo C-IIIを含むと考えられる0.25M付近のピーク(Apo C-III画分)にはミルクLPLase阻害活性が確認されたが、ラットのApo C-III画分はラットLPLase活性に殆ど影響せず、鶏Apo C-III画分が鶏LPLase活性を逆に活性化した。(2)鶏Apo C-IIIの存在の有無を確認するために、逆相カラム(Resource RPC)を用いて鶏Apo C-III画分を分離精製し、N末端分析を行った。逆相カラムではメインピークと多数のマイナ-ピークが検出された。メインピークのN末端アミノ酸配列は鶏Apo A-Iと100%の相同性を示し、Apo A-Iの部分分解物であることが明らかとなった。PMSFなどのProtease阻害剤を添加しても、同物質がメインピークであることから、鶏リポプロテインにはApc C-IIIは存在せず、かわりにApo A-Iの分解物が存在して、しかもApo A-Iの分解物は鶏LPLase活性化作用がある可能性が示唆された。(3)トリオレインエマルジョンに鶏Apo C-IIおよびApo A-I分解物を30μg/ml添加したところ、鶏LPLaseのVmはいずれも上昇したが、Apo A-I分解物の上昇率はApo C-IIの約1/3であった。(現在、本結果の投稿を準備中である)

(1)The method for preparing Apoprotein from plasma is described as follows: Apo C group was obtained after 6M urea solubilization and 0.4 M NaCl direct dissolution. The dissolution of Apo C-II was demonstrated by the activation of Apo C-II at 0.1 ~ 0.2M. The LPLase inhibition activity of Apo C-III was confirmed by the detection of Apo C-III at 0.25 M. The LPLase inhibition activity of Apo C-III was almost affected by Apo C-III and the LPLase activity of Apo C-III was reversed. (2)Apo C-III was identified by reverse phase PCR (RPC) and purified by N-terminal analysis. The reverse phase of the film is the most important part of it. The N-terminal amino acid sequence of Apo A-I is 100% identical, and the partial decomposition of Apo A-I is 100%. The addition of PMSF Protease Inhibitor, the existence of Apc C-III, the existence of Apo A-I decomposition products, and the possibility of LPLase activation of Apo A-I decomposition products are also discussed. (3)Apo C-II and Apo A-I decomposition products were added at 30μg/ml, and the increase rate of Apo A-I decomposition products was about 1/3 of that of Apo C-II. (Now, this result is being submitted.)