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マスト細胞のケミカルメディエイター産生・放出に対するα-MSHの影響

α-MSH 对肥大细胞化学介质产生和释放的影响

基本信息

批准号：
10770098
负责人：
足立史朗
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770098/
关键词：
マスト細胞 MITF MC1R α-MSH αーMSH

项目摘要

我々は昨年度、マウス培養マスト細胞(BMCMC)がa-melanocyte stimulating hormone(a-MSH)のレセプターであるMC1Rを発現しており、a-MSHの存在下では抗原刺激を受けたマスト細胞からのヒスタミン放出が約60%抑制されること、また同時に発現されるサイトカインの内IL-1bとTNF-aの転写を抑制することを明らかにした。また我々はこれまでbHLH-Zip familyに属する転写因子MITFがBMCMCに特異性の高いいくつかの遺伝子の発現を制御していることを明らかにしてきた。MITFに突然変異をもつためにDNAに結合できないmi-MITFをもつmi/miマウス由来のBMCMCでのMC1Rの発現を調べたところ、mi/miBMCMCはMC1Rを発現していないことがわかった。さらにMITFを欠損するtg/tgマウス由来のBMCMCでもMC1Rを発現していないことがわかった。これらの結果よりマウスのマスト細胞ではMITFがMC1R遺伝子の発現を制御している可能性が考えられた。次にmi/miBMCMCに正常型MITF(WT-MITF)を強制発現させたところMC1Rの発現が認められた。このことからMITFはMC1Rの発現を直接制御していることがわかった。次にMC1R遺伝子のプロモータ領域をクローニングしたところ5'上流780塩基の範囲に5箇所のE-box(MITFの認識配列)を認めた。このプロモータをもとに順次切断したプロモータならびにそれぞれのE-boxに変異を入れたプロモータを用をルシフェラーゼ遺伝子の5'端に繋いだレポータ遺伝子をマスト細胞に導入して転写活性を調べた。その結果-477から始まるCACATGモチーフと3'側に5塩基をはさんで隣接するCATGTGモチーフがMITFによるMC1R遺伝子の転写を制御していることがわかった。この2つのモチーフに実際にMITFが結合するのかをEMSA法により調べた。MITF蛋白はこれら2つのE-boxに結合すること、しかしその親和性は異なりCATGTGモチーフに対する親和性のほうが強いことが明らかになった。

Last year, I used a-melanocyte stimulating system called BMCMC. hormone(a-MSH)のレセプターであるMC1Rを発appearsしており、a-MSHの in the presence of antigen stimulation けたマストcell からのヒスThe タミン release is about 60% suppressed, the されること, the また and the に発 appear されるサイトカインの内IL-1bとTNF-aの転WRITE することを明らかにした.また我々はこれまでbHLH-Zip The family's genus する転WRits factor MITFがBMCMCにspecificity の高いいくつかの缝子の発appears していることを明らかにしてきた. MITFに suddenly different をもつためにDNAにcombinationできないmi-MITFをもつmi/miマウス originのBMC MCでのMC1Rの発行べたところ、mi/miBMCMCはMC1Rを発行していないことがわかった.さらにMITF を无码するtg/tgマウス origin のBMCMCでもMC1Rを発行出していないことがわかった.これらのRESULTSよりマウスのマストCellではMITFがMC1R缝子の発appearをcontrolしているpossibilityが考えられた. The normal type MITF (WT-MITF) of the sub-mi/miBMCMC is forced to appear in the MC1R.このことからMITFはMC1Rの発appears and directly controls していることがわかった. MC1R legacy のプロモータ区をクローニングしたところ5' upper class 780婩码の法囲に5箇shoのE-box (MITFのcognition arrangement)をcognizeめた. The このプロモータをもとにcut off the したプロモータならE-box E-boxを Use the をルシフェラーゼ伝子の5' terminal いだレポータ伝子をマストcell に to import the して転 write active を tune べた.そのRESULTS-477から开まるCACATGモチーフと3'lateralに5塩basedをはさんで adjacentするC ATGTG モチーフがMITF によるMC1R 伝子の転WRITE していることがわかった.この2つのモチーフに実界にMITFがcombineするのかをEMSA法により动べた. MITF protein has different E-box binding properties and affinityなりCATGTGモチーフに対するaffinityのほうが强いことが明らかになった.