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簡便な遺伝子導入法を用いた遺伝子治療の基礎的研究とアレルギー性疾患治療の試み

使用简单的基因转移方法进行基因治疗的基础研究和治疗过敏性疾病的尝试

基本信息

批准号：
10770103
负责人：
宮城洋平
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は高親和性IgEレセプターFceRα鎖をマウス脾細胞よりRT-PCRにてクローニングし、細胞外のIgE結合領域のみを分泌させる発現プラスミドベクターを構築した。目的蛋白のC-末端側にMYCタグを導入し免疫学的検出に用いた。ベクターをHEK293T細胞に導入し、目的蛋白が培養上清中に分泌されることが抗MYC抗体を用いたウェスタンブロット法で確認された。またCAGプロモーターを持つ pCAG-FceRαEXは、CMVプロモーターを持つpSeqTag2-FceRαEXに比べ約十倍量の蛋白を発現することがわかった。また、培養上清とIgEをin vitroで反応させたところ、ラット受身皮膚アナフィラキシー(PCA)反応を減弱した。これらの結果を得て、pCAG-FceRαの直接投与によるPCA反応の抑制を試みた。IgE皮内投与24時間前にIgE感作部位の周囲に2ヶ所10μgのプラスミドを皮内注射したところ、ラットPCA反応の抑制に成功した。このプラスミド投与後96時間では消失していた。一方、皮下注射や直下の筋肉への注射では抑制効果が得られなかった。PCA反応は非常に微量のIgEの存在で惹起されることから反応局所に高濃度のFceRαEXが発現されることが必要なためと考えられた。また、効果持続時間が短いことも同様の原因が推察される。本研究では、安価で、簡便、手軽にできる遺伝子治療として敢えて他の発現効率の高いベクターではなくプラスミドベクターを用いて実験を行っている。微量IgEで惹起されるPCA反応を抑制し得たことで、この方法の有用性が示されたと考えられる。今後は、投与方法、特に適する疾患、臓器などを良く検討し、効果の持続性の向上をはかるとともに他のアレルギーモデルへの応用を検討したい。

We constructed a high affinity IgE receptor for spleen cells by RT-PCR and secretion of extracellular IgE binding domain. The C-terminal side of the protein of interest is introduced into the immunologic assay. HEK293 T cells were introduced and secreted with anti-MYC antibody by the method of cell culture. CAG-FceR αEX, CMV, pSeqTag2-FceR α EX, and pCAG-FceR αEX are about ten times more abundant than pCAG. The supernatant IgE in vitro was reduced. The results showed that pCAG-FceRα could be directly applied to PCA and its inhibition could be detected. Intra dermal administration of IgE 24 hours ago inhibited the production of IgE by injecting 10μg of IgE into the skin. The first 96 hours after the vote disappeared. A prescription, subcutaneous injection, straight under the muscle injection, but also inhibit the effect of The presence of a very small amount of IgE in PCA results in the occurrence of high concentrations of FceRαEX. The reason for the difference between the time and effect is also discussed. This study was conducted to evaluate the efficacy of antiretroviral therapy, which was safe, simple, and manual. The usefulness of this method is demonstrated by the results of PCA inhibition in the presence of trace IgE. In the future, there will be problems with the investment method, special equipment, good inspection and improvement of the results, and other problems with the application.