心リモデリング過程における血管新生の関与-VEGF遺伝子導入による血管新生の誘導-

圧負荷肥大心リモデリング過程での微小循環障害・組織内虚血がもたらす心筋不全回避のためのVEGF過剰発現をin vivo遺伝子導入手段としてHVJ-リポソーム法を用いた。(1)vectorの作製は大阪大学細胞工学センターにより精製前HVJの供給を受け、ベクター作製を試みた。(2)in vivo transfection:導入遺伝子発現の検討については、FITC標識オリゴヌクレオチド、及びLacZ遺伝子の場合には凍結切片作製後、蛍光顕微鏡及びX-Gal染色による組織化学的方法で導入効率を検討した。投与経路は側孔付きPTCAバルーンカテーテルを用い大動脈弁直上より行った。LacZ遺伝子導入を確認後、作製したVEGF cDNA融合HVJリポソームへの直接投与を試みた。VEGF過剰発現の評価として、ノザンブロットによるmRNA発現・ウエスタンブロットによる蛋白発現の変化、組織学的検討から新生血管数を検討した。しかしながら、予想に反しVEGF mRNA・蛋白の発現に有為な増加は認められず、微小血管新生の誘導は観察できなかった。この理由として、1)投与法の問題:今回の冠動脈注入法ではvectorと内皮細胞の十分なincubationがなされなかった可能性がある。2)HVJ-リポソーム法による遺伝子導入の有効導入時期が短いため、血管新生プロセスが十分に進行できなかった可能性がある。よって上記問題点の解決にはnaked DNA vectorを用いた心筋直接投与法を試みる必要があり、現在検討中である。

圧負荷肥大心リモデリング過程での微小循環障害・組織内虚血がもたらす心筋不全回避のためのVEGF過剰発現をin vivo遺伝子導入手段としてHVJ-リポソーム法を用いた。(1)vectorの作製は大阪大学細胞工学センターにより精製前HVJの供給を受け、ベクター作製を試みた。(2)in vivo transfection:導入遺伝子発現の検討については、FITC標識オリゴヌクレオチド、及びLacZ遺伝子の場合には凍結切片作製後、蛍光顕微鏡及びX-Gal染色による組織化学的方法で導入効率を検討した。投与経路は側孔付きPTCAバルーンカテーテルを用い大動脈弁直上より行った。LacZ遺伝子導入を確認後、作製したVEGF cDNA融合HVJリポソームへの直接投与を試みた。VEGF過剰発現の評価として、ノザンブロットによるmRNA発現・ウエスタンブロットによる蛋白発現の変化、組織学的検討から新生血管数を検討した。しかしながら、予想に反しVEGF mRNA・蛋白の発現に有為な増加は認められず、微小血管新生の誘導は観察できなかった。この理由として、1)投与法の問題:今回の冠動脈注入法ではvectorと内皮細胞の十分なincubationがなされなかった可能性がある。2)HVJ-リポソーム法による遺伝子導入の有効導入時期が短いため、血管新生プロセスが十分に進行できなかった可能性がある。よって上記問題点の解決にはnaked DNA vectorを用いた心筋直接投与法を試みる必要があり、現在検討中である。