心リモデリング過程における血管新生の関与-VEGF遺伝子導入による血管新生の誘導-

血管生成参与心脏重塑过程-通过VEGF基因导入诱导血管生成-

• 批准号: 10770331
• 负责人: 桑原 史隆
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770331/
• 关键词: VEGF; HVJ-リポソーム; 圧負荷肥大心; 血管新生; DESF; 心リモデリング

圧負荷肥大心リモデリング過程での微小循環障害・組織内虚血がもたらす心筋不全回避のためのVEGF過剰発現をin vivo遺伝子導入手段としてHVJ-リポソーム法を用いた。(1)vectorの作製は大阪大学細胞工学センターにより精製前HVJの供給を受け、ベクター作製を試みた。(2)in vivo transfection:導入遺伝子発現の検討については、FITC標識オリゴヌクレオチド、及びLacZ遺伝子の場合には凍結切片作製後、蛍光顕微鏡及びX-Gal染色による組織化学的方法で導入効率を検討した。投与経路は側孔付きPTCAバルーンカテーテルを用い大動脈弁直上より行った。LacZ遺伝子導入を確認後、作製したVEGF cDNA融合HVJリポソームへの直接投与を試みた。VEGF過剰発現の評価として、ノザンブロットによるmRNA発現・ウエスタンブロットによる蛋白発現の変化、組織学的検討から新生血管数を検討した。しかしながら、予想に反しVEGF mRNA・蛋白の発現に有為な増加は認められず、微小血管新生の誘導は観察できなかった。この理由として、1)投与法の問題:今回の冠動脈注入法ではvectorと内皮細胞の十分なincubationがなされなかった可能性がある。2)HVJ-リポソーム法による遺伝子導入の有効導入時期が短いため、血管新生プロセスが十分に進行できなかった可能性がある。よって上記問題点の解決にはnaked DNA vectorを用いた心筋直接投与法を試みる必要があり、現在検討中である。

Microcirculation impairment during hypertrophic heart failure due to stress stress, myocardial insufficiency, and VEGF expression in vivo (1) The production of vector is the first step in Osaka University's cellular engineering research. (2)in Vivo transfection: In the detection of gene expression, FITC labeling, frozen sections, microscopy, and X-Gal staining were used to detect gene expression. The main purpose of the project is to improve the quality of the project. After LacZ gene introduction was confirmed, VEGF cDNA fusion was made and direct injection was performed. Evaluation of VEGF expression, expression of VEGF mRNA, expression of VEGF protein, histological examination, and number of new blood vessels The expression of VEGF mRNA and protein is expected to increase, and the induction of microangiogenesis is expected to increase. The reason for this is: 1) The problem of injection and method: The current coronary artery injection method is very difficult to incubate the endothelial cells. 2)HVJ-1000 method is suitable for the introduction of gene, and angiogenesis is very possible. The solution of the problem is to use the naked DNA vector directly.