表皮角化細胞のMAP kinase系に対する各種細胞外刺激の影響

各种细胞外刺激对表皮角质形成细胞MAP激酶系统的影响

• 批准号: 10770381
• 负责人: 中村 哲史
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770381/
• 关键词: MAP kinase; Erk; JNK; SAPK; p38; SVHK; UVB; EGF; ケラチノサイト; ERK; Fas ligand

SV40-transformed keratinocyte(SVHK)を無血清の状態で48時間培養し、細胞周期を止めた後に細胞外刺激に対するMAP kinase family(extracellular regulated kinase ; ERK, p38, stress activated protein kinase/Jun kinase ; SAPK/JNK)の変化を検討した。EGF 100ng/ml刺激では18時間で生細胞数は血清飢餓コントロールの約2.5倍まで増加した。この刺激中にERKはリン酸化され活性が上昇した。JNKも活性化された。P38は活性化されなかった。外界からの刺激であるUltraviolet B(UVB)400J/m^2では、刺激後24時間まで徐々にapoptosisを起こし、生細胞数も24時間で刺激前の7%まで減少した。ERKリン酸化はわずかであったがJNKリン酸化とp38リン酸化が亢進した。以上の系でERK kinase/MAP kinase kinase 1(MEK 1)阻害剤であるPD98059でpreincubationしてそれぞれの刺激に対する反応を検討したところEGF刺激では細胞の増殖/生存が阻害された。同時にERKとJNKの両方が阻害されEGFによる細胞の増殖/生存にはERKとJNKが関係していることが示された。同様にUVB刺激前にPD98059でpreincubateしたところapoptosisは早い時間で亢進した。同時にJNKの活性が阻害されたが、p38の活性は不変であった。このことはUVBによるapoptosisのときにはp38が主に働いており、JNKは抗apoptoticに働いている可能性が示唆された。UVBによるp38の活性化とapoptosisをさらに検討するためp38αとp38βの阻害剤SB203580でpreincubateしたが阻害効果を認めず、ケラチノサイトではp38γとp38σが主に働いている可能性を示唆した。さらにapoptosis刺激として抗Fas ligand抗体1ng/mlではSVHKはapoptosisを起こした。このときp38はリン酸化され、ERKとJNKはリン酸化されなかった。このことはFas抗体刺激のapoptosisに対してもp38が関与していることが示唆した。今後はさらにCa濃度の変更による分化誘導、浸透圧刺激などによるMAP kinasesの活性化を検討する予定である。

The serum of SV40-transformed keratinocyte (SVHK) was incubated for 48 hours. After the end of the cell cycle, MAP kinase family (extracellular regulated kinase; ERK, p38, stress activated protein kinase/Jun kinase; SAPK/JNK) was induced by extracellular stimulation. The number of fetal cells stimulated by EGF 100ng/ml was 2.5 times higher than that in serum at 18 hours after stimulation. In the course of stimulation, ERK, acidification, activity, etc. JNK is "active". P38 is active and sensitive. Ultraviolet B (UVB) 400J/ m