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Na／H交換輸送体の機能解析

Na/H交换转运蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
10770540
负责人：
花井順一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770540/
关键词：
NHE two-hybrid system クロストーク

项目摘要

腎臓は体液の質・量の恒常性を維持する中心的臓器であり、その本体は尿細管における水・電解質の輸送である。この機能を担う各輸送担体の解析は、体液調節機構の理解に重要であるとともに、それらの異常によりもたらされる各種病態の解明および治療法開発につながる。申請者は、酸の排泄や細胞内のpH調節に中心的な役割を果たす、ナトリウム/水素イオン交換輸送蛋白(Na/H exchanger:NHE)に注目し、解析を進めている。NHEは細胞膜に存在し、細胞内外のNa濃度勾配を駆動力として、Naと交換して細胞内からHを細胞外へと汲み出す機能を有する。哺乳動物において数種類のNHEアイソフォーム(NHE1-5)がクローニングされた。NHEは約800のアミノ酸残基からなり、膜貫通部位を形成するN末端500アミノ酸残基と、リン酸化など様々なpost-translational midificasionを受け細胞質蛋白と相互作用を有していると考えられるC末端300アミノ酸残基からなる。各NHEアイソフォームの細胞内局在は、C末端のpost-translational midificationのため各種報告では一定した結果が得られていなかったが、申請者は、腎尿細管由来のLLC-PK1細胞を用いてNHE-1 mRNAに対するantiseose oligonudeotideによる上皮側、基底膜側のNHE活性の抑制を検討し、NHE-1 cDNAが基底膜側のNHEのみをencodeしていることを示し、NHE-1の細胞内分布・局在を同定した(J.Cell.Physiol,1997)。NHEの機能解析をさらに進める目的で、申請者はNHEの細胞内domainとinteractする細胞内蛋白をyeastを用いたtwo-hybrid systemによりスクリーニングしているところである。現在クローンを確認している段階である。得られた蛋白の機能から、NHEの機能を検討し直し、多彩な機能が示唆されているNHEの、他の細胞機能とのクロストーク解明が期待される。上記のアプローチを進める傍ら、申請者は尿細管由来のOK7a cellへ移入したNHE-1が、基底膜に発現することを見いだした(J.Cell.Physiol,1999)。

The body fluid volume is constant to maintain the equipment in the center, the urine tube, the water supply, the electricity supply, and the delivery device. The machine is responsible for the analysis of each transport body, and the humoral apparatus understands that it is important to understand all kinds of diseases, such as the diagnosis and treatment of various diseases. In the center of acid excretion and pH excretion, the fruit was cut, the protein was delivered by Na/H exchanger:NHE, and the protein was analyzed. The membrane of NHE was present, the extracellular and extracellular Na was matched, the kinetic activity was detected, and the extracellular absorption mechanism of Na was detected. The number of animals in mammals, such as NHE, animal, animal, animal and animal. The acid residues were detected in the NHE, the acid residues in the N-terminal, the acid residues in the C-terminal, the acid residues in the C-terminal, the acid residues in the membrane, the acid residues in the N-terminal, the acid residues in the post-translational midificasion and the interaction between the cellular proteins in the membrane. The results of various reports in the NHE cell and the C-terminal post-translational midification report must be confirmed. The results show that the LLC-PK1 cell uses the NHE-1 mRNA enzyme to detect antiseose oligonudeotide epithelium, the basement membrane NHE activity inhibits the activity of the NHE, the NHE-1 cDNA basement membrane uses the NHE-1 cDNA substrate membrane to detect the activity of the NHE, and the NHE-1 cDNA basement membrane is used to detect the NHE activity. The intracellular distribution of NHE-1 grains is localized in J.Cell.Physiol. 1997). The NHE machine can be used to analyze the results of the target, the applicant, the domain, the interact, the yeast, the intracellular protein, the yeast, the two-hybrid system, the protein, the protein. We are now in the process of confirming that we are not in a position to do so. The protein machine was tested, the NHE machine was used to detect the NHE, the colorful machine was used to show that the protein was detected, and the other cell was used to explain the expectation. The urine tube of the applicant was moved into NHE-1, and the basement membrane was detected in the basement membrane (J.Cell.Physiol1999).