腎上皮細胞におけるNa/H交換輸送体の局在に関する研究

肾上皮细胞Na/H交换转运蛋白定位研究

基本信息

  • 批准号:
    08770875
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.64万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

腎尿細管における輸送担体のターゲッテング機構を解明するために、輸送担体としてナトリウム/水素イオン交換輸送蛋白(Na/H exchanger : NHE)を、モデル上皮としてLLC-PK1 細胞を用いて、NHEのアイソフォーム(NHE-1,NHE-3)の上皮細胞における局在を分子生物学的手法により解析した。1。透過性のあるフィルター膜上にLLC-PK1細胞をconfluentに培養し、上皮側、基底側それぞれのNa^+依存性の細胞内pH上昇(NHE活性)を、HCO_3^-のない条件で測定した。この結果LLC-PK1細胞においては上皮側、基底膜側にアミロライドに対する感受性が異なるNHE活性が存在することが判明した。2。上皮側にNHE-1が混入している可能性を明らかにする目的でLLC-PK1細胞のNHE-1 mRNAに対するantisense oligonucleotideを用いて、上皮側、基底膜側のNHE活性の抑制を検討した。NHE-1 cDNAの5'末端の配列に対するantisenseを用いると基底膜側のNHE活性のみが抑制されることが判明した。以上からLLC-PK1細胞においてはNHE-1は基底膜側にのみ分布しているものと考えられた。この事実はJournal of Cellular Physiology誌に発表した(in press)。3。すでにクローニングされているラットとラビットのNHE-3に共通して保存されている部分をprimerとしてLLC-PK1細胞のNHE-3 cDNAのPCRクローニングしている。得られたNHE-3 cDNA cloneを、作成したNHE欠損fibroblastに発現させ機能を検討し、また得られたcDNA cloneに対するantisenseを作成し、上記と同様の機能抑制の有無からNHE-3のLLC-PK1細胞における分布を確認している。
Renal tubule urine に お け る conveying supporter の タ ー ゲ ッ テ ン グ institutions を interpret す る た め に, conveying supporter と し て ナ ト リ ウ ム / water element イ オ ン exchange transport protein (Na/H exchanger: NHE) を, モ デ ル epithelial と し て LLC - railway cells を using い て, NHE の ア イ ソ フ ォ ー ム (NHE 1, NHE - 3) の epithelial cells に お け る bureau in を molecular biology technique に よ り parsing し た. 1. Through sexual の あ る フ ィ ル タ ー membrane に LLC - railway cells を confluent に し, epithelial side, basal side そ れ ぞ れ の Na ^ + dependency の intracellular pH rising activity (NHE) を, HCO_3 ^ - の な で い conditions determine し た. こ の results LLC - railway cells に お い て は epithelial side, basement membrane side に ア ミ ロ ラ イ ド に す seaborne る susceptibility が different な る NHE active が exist す る こ と が.at し た. 2 Epithelial side に NHE 1 が mixed with し て い る possibility を Ming ら か に す る purpose で LLC - railway cells の NHE 1 mRNA に す seaborne る antisense oligonucleotide を with い て, epithelial side, basement membrane side の NHE inhibition を の beg し 検 た. NHE 1 cDNA の 5 'end の match column に す seaborne る antisense を with い る と basement membrane side の NHE active の み が inhibit さ れ る こ と が.at し た. Above か ら LLC - railway cells に お い て は NHE 1 は basement membrane side に の み distribution し て い る も の と exam え ら れ た. The <s:1> Journal of Cellular Physiology に published in た(in press). 3 す で に ク ロ ー ニ ン グ さ れ て い る ラ ッ ト と ラ ビ ッ ト の NHE - 3 common に し て save さ れ て い る part を primer と し て LLC - railway cells の NHE - 3 cDNA の PCR ク ロ ー ニ ン グ し て い る. To obtain られたNHE-3 cDNA, cloneを, create <s:1> た nhe-deficient fibroblastに with させ function を検 to obtain また cDNA Clone に す seaborne る antisense を make し, written と with others の function inhibition の presence of か ら NHE - 3 の LLC - railway cells に お け る distribution を confirm し て い る.

项目成果

期刊论文数量(8)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
石橋由孝.花井順一他: "血液pH調節糸の基本とその障害" Medical Practice. 13. 1500-1504 (1996)
Yoshitaka Ishibashi、Junichi Hanai 等人:“血液 pH 调节线及其疾病的基础知识”医学实践 13. 1500-1504 (1996)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
池田祐一.花井順一: "溶血性尿毒症性症候群,ハイパー臨床内科" 中山書店 (in press), (1997)
Yuichi Ikeda 和 Junichi Hanai:“溶血性尿毒症综合征,超临床内科”中山书店(正在出版),(1997 年)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
吉村まどか.花井順一他: "Ca受容体" 内科. 77. 1161-1162 (1996)
Madoka Yoshimura. Junichi Hanai 等:“Ca 受体”内科医学。 77. 1161-1162 (1996)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
J.HANAI.et al: "Inhibin Activin,Follistatin.Recent Advances and Future views" Springer-Verlag,New York (in press), (1997)
J.HANAI.et al:“抑制素激活素、卵泡抑素。最新进展和未来观点”Springer-Verlag,纽约(印刷中),(1997 年)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Jun-ichi Hanai,et al.: "Na^+/H^+ exchanger (NHE) in the basolaterol membrane is encodecl by NHE-1mRNA in LLC-PK1 clone 4 cells." Journal of Cellular Physiology. (in press). (1997)
Jun-ichi Hanai 等人:“在 LLC-PK1 克隆 4 细胞中,basolaterol 膜中的 Na^ /H^ 交换器 (NHE) 由 NHE-1mRNA 编码。”
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    花井 順一
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    花井 順一

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